[发明专利]一种在大肠杆菌中制备诺如病毒病毒样颗粒的方法

摘要

本发明涉及一种在大肠杆菌中制备诺如病毒病毒样颗粒的方法，包括如下步骤：(1)酶切扩增诺如病毒主衣壳蛋白编码序列片段和pCold载体，连接酶连接并转化感受态大肠埃希菌DH5α；(2)扩增表达转化成功的大肠杆菌宿主菌株；(3)纯化扩增表达的宿主菌株中的诺如病毒主衣壳蛋白颗粒。该方法制备的病毒样颗粒稳定性高，其大小颗粒也比较均一。

主权项

1.一种诺如病毒病毒样颗粒的制备方法，包括如下步骤：(1)酶切扩增诺如病毒主衣壳蛋白编码序列片段和质粒载体，连接酶连接并转化感受态大肠埃希菌DH5α；(2)扩增表达转化成功的大肠杆菌宿主菌株；(3)纯化扩增表达的宿主菌株中的诺如病毒主衣壳蛋白颗粒；步骤(1)中所述的扩增时使用的引物序列为：NoVFL‑F GGAATTCCATATGNNNNNNNNNNNNATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAAC，NoV‑R CGGGATCCTTATAGTGCACGTCTACGCCCCGT；步骤(1)所述的酶切连接及转化方法为：用NdeI和BamHI同时酶切扩增片段目的序列和pCold载体，回收目的片段和载体片段，以T4DNA连接酶室温连接10‑30分钟，连接产物转化感受态大肠埃希菌DH5α，随机挑选单克隆，接种于LB培养基中，菌落PCR鉴定正确的菌株加入终浓度为30％灭菌甘油保存于‑80℃；所述的诺如病毒病毒样颗粒的蛋白为VP1‑M，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过前述扩增引物导入到N端的五肽的氨基酸序列为MGSSG。