[发明专利]一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法

摘要

本发明公开了一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，包括如下步骤：A、选择性富集培养与初筛；B、多孔细胞培养板复筛；C、平板培养复筛；D、菌种保存。本发明采用纤维素内切酶检测底物作为筛选指示剂和筛选培养基的唯一碳源，并通过增加培养基的选择压力(包括低营养、低pH、抑菌剂、微量元素等)，实现快速、准确地从各种复杂的样品中分离筛选出产纤维酶的高产菌株的目标；采用了反应灵敏的筛选指示剂和选择性强的筛选培养基，联合多孔培养板的应用，使筛选工作快速、准确，节约了大量人力物力。

主权项

一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：A、选择性富集培养与初筛：取样品10g加入至200ml富集筛选培养基中，28℃，150r/min摇瓶培养6～10天，分别吸取样品培养液2ml离心，10000rpm，10min，取500μl用分光光度计检测，测590nm的OD值，选OD值大于0.3的试样为候选含有产纤维素酶菌种的试样，取该试样的菌液作梯度稀释，在PDA平板上分离出单菌落；B、多孔细胞培养板复筛：将步骤A中分离出的单菌落分别接入多孔细胞培养板的孔中培养，孔中培养基为产酶培养基300μl，28℃，静置培养6天，孔中出现蓝色者为目标菌，将多孔细胞培养板置于离心机中离心，8000rpm，30min，分别吸取各孔上清200μl至另外一个多孔细胞培养板用酶标仪进行检测，测590nm的OD值，选OD值大于1.0的菌株为候选产纤维素酶菌种；C、平板培养复筛：将步骤B中的候选产纤维素酶菌种在平板复筛培养基上进行划线培养，28℃，静置培养6天，根据菌落显色圈直径与菌落直径的比值大小确定菌种的产酶能力，直径比大于2.2的菌种为最终纤维素酶高产菌株；D、菌种保存：将目标菌接到PDA平板培养基，28℃静置培养7～14天，观察菌落形态；将目标菌接入YPD液体培养基摇瓶培养，28℃，150r/min，6天，显微镜观察菌体形态一致，将YPD液体培养基摇瓶培养物作甘油保存；即得纤维素分解真菌。