[发明专利]一种从动物组织中获得原代细胞的组织块培养方法

摘要

本发明属于现代生物技术之细胞培养技术领域，本发明提供了从动物组织中获得原代细胞的组织块培养方法，可通用于不同来源的组织进行原代细胞培养，是将所需要培养的组织收集在冰预冷的含5×双抗的胎牛血清中，洗去组织表面血污，放在胎牛血清里剪碎，均匀铺在皿/孔上，倒置在孵箱中1-2h，利用胎牛血清使组织黏贴在培养皿/孔上，沿培养皿/孔边缓慢加入适量的相应培养液，轻轻挪入孵箱中培养。本发明的方法培养各类原代细胞的成功率高，在形态结构和功能活动上更好地保持了体内原组织的状态，表达相应特异性标记的细胞比例都很高，而且数量多，本发明为原代细胞的研究提供了丰富而全面的实验材料，在基础研究及临床应用上都具有广泛的前景。

主权项

一种原代细胞的组织块培养方法，包括以下步骤：a)将组织处理器械浸泡到75％乙醇放入超净台中，紫外灭菌30min；b)将组织处理器械从75％乙醇中取出放超净台里晾干；c)在装有胎牛血清的容器中加入5倍的青霉素‑链霉素双抗，插入冰里；d)培养皿或培养孔中滴入适量胎牛血清；e)取组织放入步骤c)的含抗生素的胎牛血清中，吹打组织，以去除表面血污；再将组织放入步骤d)培养皿或培养孔中的胎牛血清中；f)反复剪切胎牛血清中的组织，将组织剪成或切成0.5‑2mm3的组织块，将组织块均匀地铺在培养皿或培养孔里，每个组织块间距为0.2cm‑0.5cm；g)倒置在孵箱中1‑2h，沿培养皿或培养孔边缓慢加入适量的相应培养液，勿使组织块漂起，轻轻挪入孵箱中培养；h)3‑6天换液一次，换液时轻轻吸掉原液，加入新的培养液；i)待原代细胞从组织块爬出后，用吸管吸培养液轻轻吹打组织块将其吹掉，换上新的培养液继续培养细胞，直至长满培养皿或培养孔底，进行传代或进一步筛选。