[发明专利]一种从动物组织中获得原代细胞的组织块培养方法

权利要求书

1.一种原代细胞的组织块培养方法，包括以下步骤：

a)将组织处理器械浸泡到75％乙醇放入超净台中，紫外灭菌30min；

b)将组织处理器械从75％乙醇中取出放超净台里晾干；

c)在装有胎牛血清的容器中加入5倍的青霉素-链霉素双抗，插入冰里；

d)培养皿或培养孔中滴入适量胎牛血清；

e)取组织放入步骤c)的含抗生素的胎牛血清中，吹打组织，以去除表面血污；再将组织放入步骤d)培养皿或培养孔中的胎牛血清中；

f)反复剪切胎牛血清中的组织，将组织剪成或切成0.5-2mm³的组织块，将组织块均匀地铺在培养皿或培养孔里，每个组织块间距为0.2cm-0.5cm；

g)倒置在孵箱中1-2h，沿培养皿或培养孔边缓慢加入适量的相应培养液，勿使组织块漂起，轻轻挪入孵箱中培养；

h)3-6天换液一次，换液时轻轻吸掉原液，加入新的培养液；

i)待原代细胞从组织块爬出后，用吸管吸培养液轻轻吹打组织块将其吹掉，换上新的培养液继续培养细胞，直至长满培养皿或培养孔底，进行传代或进一步筛选。

2.根据权利要求1所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，在步骤i)之后，还包括以下步骤：

j)细胞形态学观察与鉴定：镜下进行形态学观察，并通过免疫细胞化学、流式细胞仪检测每种细胞相应的特异性标记物。

3.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，所述的适量胎牛血清，是指胎牛血清的用量要没入组织。

4.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，步骤f)中，将组织剪成或切成1mm³大小的组织块。

5.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，所述的组织为动物组织。

6.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，所述的组织为小鼠、大鼠、猪、兔、狗、羊，或人的正常组织或癌组织。

7.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，所述的组织为小鼠肺组织、小鼠胰腺组织、人牙髓组织、人牙周膜组织、人脐静脉组织、人脑胶质瘤组织、人前列腺癌原发灶组织培养、人前列腺癌淋巴结转移灶组织，或人血管瘤组织。

8.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法，其特征在于，所述的原代细胞为小鼠原代肺微血管内皮细胞、小鼠原代胰腺导管细胞、小鼠原代胰腺星状细胞、人原代牙髓干细胞、人原代牙周膜细胞、人原代脐静脉内皮细胞、人原代脑胶质瘤细胞、人原代前列腺癌细胞，或人原代血管瘤内皮细胞。