[发明专利]一种从动物组织中获得原代细胞的组织块培养方法在审

专利信息
申请号: 201510079966.3 申请日: 2015-02-13
公开(公告)号: CN104673743A 公开(公告)日: 2015-06-03
发明(设计)人: 刘善荣;王录美;王星星;刘淑鹏;戎庭军;刘岸斐;刘牧云;赵朕华 申请(专利权)人: 中国人民解放军第二军医大学
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071;C12N5/09;C12N5/074
代理公司: 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 代理人: 赵青
地址: 200433 *** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 动物 组织 获得 细胞 培养 方法
【权利要求书】:

1.一种原代细胞的组织块培养方法,包括以下步骤:

a)将组织处理器械浸泡到75%乙醇放入超净台中,紫外灭菌30min;

b)将组织处理器械从75%乙醇中取出放超净台里晾干;

c)在装有胎牛血清的容器中加入5倍的青霉素-链霉素双抗,插入冰里;

d)培养皿或培养孔中滴入适量胎牛血清;

e)取组织放入步骤c)的含抗生素的胎牛血清中,吹打组织,以去除表面血污;再将组织放入步骤d)培养皿或培养孔中的胎牛血清中;

f)反复剪切胎牛血清中的组织,将组织剪成或切成0.5-2mm3的组织块,将组织块均匀地铺在培养皿或培养孔里,每个组织块间距为0.2cm-0.5cm;

g)倒置在孵箱中1-2h,沿培养皿或培养孔边缓慢加入适量的相应培养液,勿使组织块漂起,轻轻挪入孵箱中培养;

h)3-6天换液一次,换液时轻轻吸掉原液,加入新的培养液;

i)待原代细胞从组织块爬出后,用吸管吸培养液轻轻吹打组织块将其吹掉,换上新的培养液继续培养细胞,直至长满培养皿或培养孔底,进行传代或进一步筛选。

2.根据权利要求1所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,在步骤i)之后,还包括以下步骤:

j)细胞形态学观察与鉴定:镜下进行形态学观察,并通过免疫细胞化学、流式细胞仪检测每种细胞相应的特异性标记物。

3.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,所述的适量胎牛血清,是指胎牛血清的用量要没入组织。

4.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,步骤f)中,将组织剪成或切成1mm3大小的组织块。

5.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,所述的组织为动物组织。

6.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,所述的组织为小鼠、大鼠、猪、兔、狗、羊,或人的正常组织或癌组织。

7.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,所述的组织为小鼠肺组织、小鼠胰腺组织、人牙髓组织、人牙周膜组织、人脐静脉组织、人脑胶质瘤组织、人前列腺癌原发灶组织培养、人前列腺癌淋巴结转移灶组织,或人血管瘤组织。

8.根据权利要求1或2所述的一种原代细胞的组织块培养方法,其特征在于,所述的原代细胞为小鼠原代肺微血管内皮细胞、小鼠原代胰腺导管细胞、小鼠原代胰腺星状细胞、人原代牙髓干细胞、人原代牙周膜细胞、人原代脐静脉内皮细胞、人原代脑胶质瘤细胞、人原代前列腺癌细胞,或人原代血管瘤内皮细胞。

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