[发明专利]一种人抗凝血酶Ⅲ的生产方法

摘要

本发明涉及一种人抗凝血酶Ⅲ的生产方法，步骤为：将新鲜冰冻人血浆去除冷沉淀获得血浆上清，上清液使用DEAE Sephadex‑A50凝胶吸附处理；血浆上清杂质蛋白沉淀及血浆深层过滤；Capto Heparin亲和层析；S/D病毒灭活及Capto Q离子交换层析去除S/D试剂；纳米膜过滤去除病毒，配制、冻干、干热。该工艺仅使用一步亲和层析制备抗凝血酶Ⅲ，回收率可达40%以上，比活可达8~10IU/mg。

主权项

1.一种人抗凝血酶Ⅲ的生产方法，步骤如下：（1）新鲜冰冻人血浆离心去除冷沉淀，DEAE Sephadex‑A50凝胶吸附；（2）血浆上清沉淀杂质蛋白，深层过滤；（3）滤过液Capto Heparin 亲和层析；（4）S/D试剂病毒灭活，Capto Q离子交换层析去除S/D试剂；（5）纳米膜过滤去除病毒，配制、冻干、干热；所述的步骤（1）新鲜冰冻人血浆离心去除冷沉淀， DEAE Sephadex‑A50凝胶吸附；具体的步骤如下：将新鲜冰冻人血浆融化混匀后，经连续流离心机去除血浆中的冷沉淀，得到离心后的血浆上清液；血浆上清采用1~10μm的滤芯过滤，调节血浆pH至6.80~7.20；加入平衡好的DEAE Sephadex‑A50凝胶搅拌吸附30~60分钟，吸附温度≤15℃；采用0.2~1μm微孔滤芯过滤，滤除凝胶获得吸附处理后的血浆上清；DEAE Sephadex A50干胶量为 1.0~2.0g/kg血浆；0.05~0.1mol/L 氯化钠溶液融胀≥8小时；平衡3~5次；再生用1.0～2.0mol/L氯化钠溶液处理，20%乙醇保存；再生次数不超过10次；平衡液：0.015~0.025mol/L 枸橼酸钠，0.14~0.20mol/L氯化钠，pH 6.80~7.20，温度2~8℃；加入1~2倍凝胶体积的洗涤液，搅拌洗涤1~3次，将洗涤液采用0.2~1μm微孔滤芯过滤后，与滤除凝胶后的血浆上清合并，得到处理后的血浆上清；所述的洗涤液：0.015~0.025mol/L 枸橼酸钠，0.14~0.20mol/L氯化钠，pH 6.80~7.20，温度2~8℃。