[发明专利]一种人运动神经元基因拷贝数相对定量检测方法及试剂盒

摘要

本发明属于体外核酸检测技术领域，具体为一种人运动神经元基因拷贝数相对定量检测方法及试剂盒。本发明分别设计了SMN1、SMN2基因第7和第8外显子和内参基因RPP40的特异性引物和探针。同时设计SMN1基因Y272C、11bp‑DUP、4bp‑DEL三个热点突变的定性检测引物和探针。试剂盒包括含有检测引物探针组合物的容器、对照品容器和PCR反应液容器。通过5个独立的PCR反应分别对SMN1第7和第8外显子（第1、第2 PCR反应）、SMN2基因第7和第8外显子（第3、第4 PCR反应）进行拷贝数相对定量，并对Y272C、11bp‑DUP、4bp‑DEL三个热点突变进行定性检测（第5 PCR反应）。本发明特异性强、灵敏度高、简便、快速，适于大规模推广应用。

主权项

一种用于人运动神经元拷贝数相对定量检测方法的引物与探针组合物，其特征在于包括：公用引物与探针组合物：公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5所示；用于检测SMN1基因第7外显子的上游引物PE7‑1F、下游引物PE7‑1R、检测探针PE7‑1D、封闭探针PE7‑2A组合物；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9所示；用于检测SMN1第8外显子的上游引物PE8‑1F、下游引物PE8‑1R、检测探针PE8‑1D、SMN2第8外显子封闭探针PE8‑2A组合物；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQ ID No.12、SEQ ID No.13所示；用于检测SMN2第7外显子的上游引物PE7‑2F、下游引物PE7‑2R、检测探针PE7‑2D、封闭探针PE7‑1A组合物；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.14、SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17所示；用于检测SMN2第8外显子的上游引物PE8‑2F、下游引物PE8‑2R、检测探针PE8‑2D、封闭探针PE8‑1A组合物；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.18、SEQ ID No.19、SEQ ID No.20、SEQ ID No.21所示；还包括下述引物与探针组合物：用于检测SMN1第6外显子和第3外显子3个热点突变的， SMN1第6外显子Y272C上游引物P272‑F、SMN1第6外显子11bp‑DUP上游引物P11‑F、SMN1第6外显子下游引物PE6‑R、SMN1第6外显子Y272C检测探针P272‑D、SMN1第6外显子Y272C竞争探针P272‑A、SMN1第6外显子11bp‑DUP检测探针P11‑D、SMN1第3外显子4bp‑DEL上游引物PE3‑4F、SMN1第3外显子4bp‑DEL下游引物PE3‑4R、SMN1第3外显子4bp‑DEL检测探针PE3‑4D；其核苷酸序列依次为：SEQ ID No.22、SEQ ID No.23、SEQ ID No.24、SEQ ID No.25、SEQ ID No.26、SEQ ID No.27、SEQ ID No.28、SEQ ID No.29、SEQ ID No.30。