[发明专利]一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法在审
| 申请号： | 201510050370.0 | 申请日： | 2015-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN104630251A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 李俊;徐江;陈永恒;陈林;闫宁宁;陈主初 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅医院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C07K14/46 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 马强;周栋 |
| 地址： | 410078 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法。所述方法包括：1)优化MitTxα及MitTxβ基因序列；2)重组MitTxα及MitTxβ蛋白的表达与复性；3)MitTxα复性后溶液的阳离子交换纯化；4)MitTxβ复性后的阴离子交换纯化；5)将步骤3流穿产物的阳离子交换纯化；6)步骤2和4产物的结合实验。本发明可以得到MitTx蛋白纯品，可用于大规模生产和纯化，节约了纯化成本提高纯化效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 珊瑚 蛇毒 蛋白 mittx 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)优化MitTxα及MitTxβ的编码序列，优化后的MitTxα的编码序列如SEQ ID NO.1所示，优化后的MitTxβ的编码序列如SEQ ID NO.2所示；(2)以优化后的MitTxα的编码序列为基础构建重组载体MitTxα‑pET22b；以优化后的MitTxβ的编码序列为基础构建重组载体MitTxβ‑pET22b；所述重组载体MitTxα‑pET22b的序列如SEQ ID NO.3所示；所述重组载体MitTxβ‑pET22b的序列如SEQ ID NO.4所示；(3)将重组载体MitTxα‑pET22b和重组载体MitTxβ‑pET22b转化大肠杆BL21表达菌株，并制备MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体；(4)分别对MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体进行复性；将复性后的MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体分离纯化，得到MitTxα蛋白和MitTxβ蛋白，MitTxα蛋白和MitTxβ蛋白非共价结合，得到重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx。
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