[发明专利]一种稗草组织培养成苗的方法

摘要

本发明涉及一种稗草组织培养成苗的方法，所述方法是用成熟稗草种子作为外殖体，通过去除部分胚乳、吸水、消毒等处理，在28℃黑暗条件下置于愈伤组织诱导培养基上，7天后长出愈伤组织。然后将愈伤置于继代培养基上培养7天。接着将继代后的愈伤转入分化培养基上培养14天，接着在相同的温光条件下，将分化苗转入生根培养基上培养7天，空气中用自来水浇灌3天后，移栽入土壤可得稗草的组织培养苗。本发明选用稗草成熟种子作为外殖体，因为稗草种子易获得，稗草产种量大，易保存，易诱导再生，脱分化和再分化的过程易掌握，实验的重复性好，且生根率高。

主权项

一种稗草组织培养成苗的方法，所述方法包括如下步骤：(1)种子处理：选取对二氯喹啉酸敏感稗草种子，去除种皮与一半胚乳，将带胚乳的半粒种子在室温下用灭菌水浸泡3～4小时后，着用60～70％乙醇浸泡30～60秒，再用无菌水冲洗2～3次，接着用0.05～0.1％的升汞边振荡边消毒10～15分钟，接着再用无菌水冲洗4～5次，最后一次浸泡20～30分钟，再用无菌水边振荡边清洗1次，然后在超净台上将种子置于无菌滤纸上10～15min；(2)愈伤诱导培养：将处理后的种子放在愈伤组织诱导培养基上，在28～30℃黑暗培养6～8天；所述愈伤组织诱导培养基组成如下：0.5～0.6g/L水解酪蛋白，3～5％蔗糖，8～10g/L琼脂，1.0～2.0mg/L2,4‑D，0.2～0.3mg/L 6‑BA，0.1～0.2mg/L NAA，溶剂为MS培养基；(3)继代培养：挑选白色、紧实、未污染的愈伤转移到继代培养基上，在28～30℃、3000～4000lx光照16小时、黑暗8小时条件下，培养5～8天；所述继代培养基组成如下：0.2～0.3mmol/L甘露醇，3～5％蔗糖，8～10g/L琼脂，0.5～0.8mg/L 2,4‑D，0.5～0.8mg/L 6‑BA，溶剂为MS培养基；(4)愈伤分化培养：挑选紧实、未污染的愈伤转移到分化培养基上，在28～30℃、3000～4000lx光照16小时、黑暗8小时条件下，培养10～14天；所述分化培养基组成如下：0.5～0.6g/L水解酪蛋白，3～5％蔗糖，8～10g/L琼脂，0.2～0.4mg/L ZT，1.0～2.0mg/L NAA，溶剂为MS培养基；(5)生根培养及移栽：挑选已经生芽、未污染的愈伤转移到生根培养基上，在28～30℃16小时光照、黑暗8小时、3000～4000lx光强条件下，培养7～8天，待根长出后，用自来水浇灌3天，然后移栽土壤；所述生根培养基组成如下：0.5～0.6g/L水解酪蛋白，3～5％蔗糖，8～10g/L琼脂，溶剂为1/2MS培养基。