[发明专利]一种基于光诱导电子转移筛选G‑四链体配体的方法

摘要

本发明涉及一种基于光诱导电子转移筛选G‑四链体配体的方法，其是通过向发夹型DNA稀释液中加入一定量的中药单体溶液，检测发夹型DNA溶液在加入中药单体溶液前后的荧光强度变化，即可实现G‑四链体配体的筛选，本发明充分利用G‑四链体的配体可以诱导包含人端粒DNA片段的发夹探针形成G‑四链体，使得发夹探针上标记的羧基荧光素(FAM)堆积在由四个G碱基组成的G四分体平面上，与G碱基靠近而发生光诱导电子转移，荧光强度降低的机理，具有操作简单、响应快速、普适性强、易于推广的优点，能够实现G‑四链体配体的高通量筛选，为筛选以G‑四链体为靶点的抗肿瘤药物提供了一种简单、有效的途径。

主权项

一种基于光诱导电子转移筛选G‑四链体配体的方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)将发夹型DNA用20mmol/L pH＝7.4的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液配制浓度为100μmol/L的发夹型DNA溶液，放于4℃以下保存；所述发夹型DNA的序列为5'‑FAM‑TAGCCCTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGCTA‑3’，其中FAM代表羧基荧光素；(2)用20mmol/L pH＝7.4的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液将步骤(1)的发夹型DNA溶液浓度从100μmol/L稀释成50nmol/L，取浓度为50nmol/L的发夹型DNA溶液加入96孔板中，测定初始荧光强度值；(3)在步骤(2)的基础上加入中药单体溶液使其在反应体系的最终浓度为10μmol/L，测定加入中药单体溶液后的荧光强度值，若荧光强度值降低，说明该中药单体诱导单链的发夹型DNA形成G‑四链体结构；若否，则说明该中药单体不能诱导单链的发夹型DNA形成G‑四链体结构，根据荧光信号的变化即完成G‑四链体配体的筛选。