[发明专利]卡贝缩宫素的合成工艺

摘要

本发明一种卡贝缩宫素的合成工艺，包括以下步骤：将Fmoc-Gly-OH与步骤一Rink Amide-AM Resin偶联反应获得Fmoc-Gly-Rink Amide-AM Resin；DBLK去保护(20%哌啶)得到H-Gly-Rink Amide-AM RFesin依次完成H-Gly-Rink Amide-AM Resin与Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(Me)-OH及四氯丁酸的偶联，直至合成卡贝缩宫素线性肽树脂；将裂解剂与步骤四获得的卡贝缩宫素线性肽树脂混合发生裂解反应，从而去除Rink Amide-AM Resin和侧链保护基；卡贝缩宫素线性粗肽环化成卡贝缩宫素粗品，分离纯化制得卡贝缩宫素。本发明合成工艺防止产生的聚合副反应，极大的简化工艺路线，降低了生产成本，提高了合成效率，且成品纯度高，便于规模化生产，同时有利于环保，有着显著的经济社会效益。

主权项

一种卡贝缩宫素的合成工艺，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、以AM Resin为起始载体，在缩合试1‑羟基苯并三唑（HOBT）和N,N'‑二异丙基碳二亚胺（DIC）的作用下，偶联Rink Amide‑AM Linker，制得Rink Amide‑AM Resin，此Rink Amide‑AM Resin替代度为sub=0.7~0.8 mmol/g；步骤二、采用固相多肽逐步缩合法，根据肽序从C端至N端，首先将Fmoc‑Gly‑OH与步骤一Rink Amide‑AM Resin偶联反应获得Fmoc‑Gly‑Rink Amide‑AM Resin；步骤三、去除步骤二Fmoc‑Gly‑Rink Amide‑AM Resin的保护基Fmoc，从而获得H‑Gly‑Rink Amide‑AM Resin；步骤四、采用固相多肽逐步缩合法逐步依次完成H‑Gly‑Rink Amide‑AM Resin与Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑OH、Fmoc‑Ile‑OH、Fmoc‑Tyr(Me)‑OH的偶联，合成卡贝缩宫素的前体肽Fmoc‑Tyr(me)‑‑Ile‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Leu‑Gly‑RinkAmide‑AM Resin；步骤五、DBLK（20%哌啶/DMF混合溶液）去除卡贝缩宫素的前体肽中保护基Fmoc得到H‑Tyr(me)‑‑Ile‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Leu‑Gly‑Rink Amide‑AM Resin 茚三酮检测显阳性，将四氯丁酸/HOBT按摩尔量的3倍称量好加入去完保护的前体肽H‑Tyr(me)‑‑Ile‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Leu‑Gly‑RinkAmide‑AM Resin中加入适当的DMF使其搅拌均与反应1~2h 茚三酮检测显阴性，抽掉反应液加入适当甲醇使其搅拌均匀，抽掉甲醇真空抽干树脂直至合成卡贝缩宫素线性肽树脂；步骤六、将裂解剂与步骤五获得的卡贝缩宫素线性肽树脂混合发生裂解反应，从而去除Rink Amide‑AM Resin和卡贝缩宫素侧链保护基，再依次通过沉降、离心、洗涤、干燥获得卡贝缩宫素线性粗肽；步骤七、将步骤六获得干燥后的卡贝缩宫素线性粗肽研磨至成粉末状，用二甲基亚砜（DMSO）溶解卡贝缩宫素粗肽至浓度为1mmol/20ml，从而获得卡贝缩宫素线性粗肽溶液；步骤八、向所述卡贝缩宫素线性粗肽溶液中滴加30%的稀氨水饱和碳酸钾（K2CO3）调节卡贝缩宫素线性粗肽溶液pH至9~10，并将温度调至50~60摄氏度，当pH至9~10、温度调至50~60摄氏度时，立刻向环化溶液中加入0.2g/mmol的三‑（2‑羧乙基）‑膦盐酸盐（TCEP），环化时间为1~2h；步骤九、将步骤八中的卡贝缩宫素粗品溶液经过C18反相高效液相色谱柱分离纯化，旋蒸冻干后，制得卡贝缩宫素。