[发明专利]用于肝靶向和治疗的CRISPR-CAS系统、载体和组合物的递送与用途

摘要

本发明提供了用于操纵序列和/或靶序列的活性的系统、方法、和组合物的递送、工程化和优化。提供了递送系统和被靶向作为用于递送的部位的组织或器官。还提供了载体和载体系统、以及用于设计和使用此类载体的方法，其中这些载体和载体系统中的一些编码CRISPR复合物的一种或多种组分。还提供了指导在真核细胞中形成CRISPR复合物的方法，以确保对于靶标识别的增强特异性和避免毒性，并且以编辑或修饰在感兴趣基因组座位中的靶位点以便改变或改善疾病或病症的状态。

主权项

一种通过操纵在感兴趣基因组座位中的肝靶序列来修饰生物或非人类生物的方法，该方法包括递送非天然存在的或工程化的组合物，该组合物包含：A)‑I.CRISPR‑Cas系统RNA多核苷酸序列，其中该多核苷酸序列包含：(a)指导序列，该指导序列能够杂交到真核细胞中的肝靶序列上，(b)tracr配对序列，和(c)tracr序列，以及II.编码CRISPR酶的多核苷酸序列，该CRISPR酶任选地包含至少一个或多个核定位序列，其中(a)、(b)和(c)以5’到3’方向排列，其中在转录时，该tracr配对序列杂交到该tracr序列上，并且该指导序列引导CRISPR复合物与该肝靶序列的序列特异性结合，并且其中该CRISPR复合物包含与(1)杂交或可杂交到该肝靶序列上的该指导序列、和(2)杂交或可杂交到该tracr序列上的该tracr配对序列复合的CRISPR酶，并且编码CRISPR酶的多核苷酸序列是DNA或RNA，或者(B)I.多核苷酸，其包含：(a)指导序列，该指导序列能够杂交到真核细胞中的肝靶序列上，和(b)至少一种或多种tracr配对序列，II.编码CRISPR酶的多核苷酸序列，以及III.包含tracr序列的多核苷酸序列，其中在转录时，该tracr配对序列杂交到该tracr序列上，并且该指导序列引导CRISPR复合物与该肝靶序列的序列特异性结合，并且其中该CRISPR复合物包含与(1)杂交或可杂交到该肝靶序列上的该指导序列、和(2)杂交或可杂交到该tracr序列上的该tracr配对序列复合的CRISPR酶，并且编码CRISPR酶的多核苷酸序列是DNA或RNA。