[发明专利]用于肝靶向和治疗的CRISPR-CAS系统、载体和组合物的递送与用途

权利要求书

1.包含CRISPR-Cas系统或编码该CRISPR-Cas系统的一种或多种多核苷酸的组合物在制备用于在生物体内治疗肝脏疾病或障碍的药物中的用途，该CRISPR-Cas系统包含：包含至少一个核定位序列的Cas9，能杂交到在肝脏中表达并与肝脏疾病或障碍中涉及的基因相关的肝靶序列上的指导序列，tracr配对序列和tracr序列；

其中该组合物包含一种或多种病毒载体，该病毒载体包含：

(a)第一调节元件，该第一调节元件可操作地连接到编码指导序列、tracr配对序列和tracr序列的多核苷酸序列上，以及

(b)第二调节元件，该第二调节元件可操作地连接到编码Cas9的多核苷酸序列上，该Cas9包含至少一个核定位序列，

其中组分(a)和(b)位于相同或不同载体上。

2.包含CRISPR-Cas系统或编码该CRISPR-Cas系统的一种或多种多核苷酸的组合物在制备用于在生物体内治疗肝脏疾病或障碍的药物中的用途，该CRISPR-Cas系统包含：包含至少一个核定位序列的Cas9，能杂交到在肝脏中表达并与肝脏疾病或障碍中涉及的基因相关的肝靶序列上的指导序列，tracr配对序列和tracr序列；

其中该组合物包含：

(a)从5’至3’包含指导序列、tracr配对序列和tracr序列的多核苷酸序列，以及

(b)编码Cas9和至少一个核定位序列的多核苷酸序列，

其中该tracr配对序列能够杂交到该tracr序列上，其中该指导序列能够引导包含Cas9的CRISPR复合物与该靶序列的序列特异性结合，并且其中编码Cas9的多核苷酸序列是DNA或RNA。

3.包含CRISPR-Cas系统或编码该CRISPR-Cas系统的一种或多种多核苷酸的组合物在制备用于在生物体内治疗肝脏疾病或障碍的药物中的用途，该CRISPR-Cas系统包含：包含至少一个核定位序列的Cas9，能杂交到在肝脏中表达并与肝脏疾病或障碍中涉及的基因相关的肝靶序列上的指导序列，tracr配对序列和tracr序列；

其中该组合物包含：

(a)包含指导序列和tracr配对序列的多核苷酸序列，

(b)编码Cas9和至少一个核定位序列的多核苷酸序列，以及

(c)包含tracr序列的多核苷酸序列，

其中该tracr配对序列能够杂交到该tracr序列上，其中该指导序列能够引导包含Cas9的CRISPR复合物与该靶序列的序列特异性结合，并且其中编码Cas9的多核苷酸序列是DNA或RNA。

4.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该CRISPR-Cas系统能够改变肝脏中基因产物的表达，由此产生表型改变。

5.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该药物被制备用于递送至生物中的肝脏细胞。

6.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该药物用于治疗或抑制由肝脏中表达的肝靶序列的缺陷引起的病症。

7.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该CRISPR-Cas系统能够改变肝脏中两种或更多种肝基因产物的表达。

8.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该指导序列融合至tracr配对序列和tracr序列。

9.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中编码Cas9的多核苷酸序列经密码子优化以便在该生物中表达。

10.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该生物是哺乳动物。

11.如权利要求1到3中任一项所述的用途，其中该Cas9是化脓链球菌或金黄色葡萄球菌Cas。