[发明专利]高分辨率解链的改进校准

摘要

本发明涉及用于在高分辨率解链PCR实验中进行温度校准的方法和试剂盒。本发明进一步涉及用于最优校准的方法，其允许靶物和校准物的相同或相似解链温度的读出。本发明进一步涉及用于实施所述方法的仪器和执行所述方法的计算机程序。

主权项

用于在PCR实验中温度校准的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)在多孔板的每个孔中提供用于扩增样品中的特定靶核酸的反应混合物，其包含荧光非共价双链DNA结合染料，b)在每个孔中提供双链寡核苷酸，其中供体生色团共价结合所述双链寡核苷酸的第一条链，且其中接受体生色团共价结合所述双链寡核苷酸的第二条链，c)在每一个孔中扩增所述特定靶核酸，d)在每个孔中解链扩增的特定靶核酸从而导致自所述荧光非共价双链DNA结合染料的放射发射减少，以及解链所述双链寡核苷酸从而导致自供体生色团的放射发射增加或自接受体生色团的放射发射减少，其通过空间分离供体生色团和受体生色团实现，e)通过检测自所述荧光非共价双链DNA结合染料的放射发射的减少在每个孔中监控所述扩增的特定靶核酸的解链温度值，并且分开地通过检测自所述供体生色团的放射发射的增加或自所述接受体生色团的放射发射的减少在每个孔中监控所述双链寡核苷酸的解链温度值，f)基于所述双链寡核苷酸的解链温度值的孔与孔差异，对每个孔修正所述扩增的特定靶核酸的解链温度值；其中所述荧光非共价双链DNA结合染料的放射波长和所述供体生色团的放射波长彼此分开。