[发明专利]采用引物关联通用探针检测多重基因或不同靶标的实时荧光PCR方法

摘要

本发明公开了一种采用引物关联通用探针检测多重基因或不同靶标的实时荧光PCR方法，依靠特殊结构的复合序列引物，在起始扩增的过程中，在扩增产物末端引入通用探针和通用放大引物的结合位置，从而实现不同靶标，采用相同探针实时荧光检测。本发明的优点在于生产工艺简单、便于控制，减少了探针绝对使用量，降低了试剂成本。在单重检测中，不同项目可以共用一条探针，生产工艺得到简化，便于控制；在多重检测时，不同靶标采用同一探针实现特异实时荧光检测，无需添加不同探针，直接减少探针绝对使用量，避免了多探针荧光本底高导致检测曲线差、敏感度低的问题，同时使用同一探针也减少了试剂成本。

主权项

一种采用引物关联通用探针检测多重基因或不同靶标的实时荧光PCR方法，其特征在于：第一，反应为聚合酶链式反应，包括特殊的引物系统、探针、聚合酶、dNTPS、缓冲液；第二，引物系统包含：靶序列特异引物F、通用放大引物R0和复合序列引物RC；第三，探针为通用探针P0，不同靶标可以采用同一通用探针检测；第四，复合序列引物从5’端到3’端依次包含如下结构：通用放大引物序列R0区、通用探针序列P0区、靶特异结合区R区；复合序列引物的靶特异结合区R与靶标结合、延伸，将通用放大引物序列R0区和通用探针序列P0区连接入扩增产物；靶序列特异引物F结合本扩增产物，延伸产生含有通用放大引物R0和通用探针P0结合区的产物，进入主放大检测反应；第五，主放大反应，为常规的荧光PCR反应，依靠通用放大引物序列R0、通用探针序列P0、靶序列特异引物F，放大新产生的模板链，产生信号。