[发明专利]基于硝基还原酶的电化学酶联免疫方法测定三聚氰胺

摘要

本发明公开了一种电化学聚合信号放大的酶联免疫方法，用于乳制品中三聚氰胺的定量检测。方法采用竞争免疫反应，所用酶标二抗为硝基还原酶标记二抗，底物为硼氢化钠与邻硝基苯酚。在酶催化作用下，硼氢化钠将无法电聚合的邻硝基苯酚还原成可电化学聚合的邻氨基苯酚。反应后加入石墨烯作为电解质，用丝网印刷电极进行循环伏安电化学聚合。在电极表面滴加电解质溶液，检测电极表面形成的纳米复合物放大的电化学信号，从而测定样品中三聚氰胺的含量。本发明提出的方法结合了免疫反应的高特异性和纳米电聚合催化的高灵敏性，具有方法简便，准确度高，灵敏度好，检出限低的优点，可用于乳制品中三聚氰胺含量的测定。

主权项

一种基于电化学聚合信号放大的酶联免疫方法，并应用在乳制品中三聚氰胺的快速、灵敏的定量检测，其特征在于：将三聚氰胺标准品或样品和三聚氰胺抗体放置在包被有三聚氰胺半抗原的多孔酶标板孔中进行竞争免疫反应，形成抗原‑抗体复合物后加入酶标二抗与抗体进行反应；在酶标二抗与抗体反应后加入酶促反应底物；酶反应完成后向孔中加入石墨烯作为电解质，并将丝网印刷电极插入其中进行电化学聚合；聚合完成后将电极取出，在电极表面滴加电解质溶液，检测电极表面形成的纳米复合物放大的电化学信号，从而检测样品中三聚氰胺的含量。