[发明专利]基于硝基还原酶的电化学酶联免疫方法测定三聚氰胺

权利要求书

1.一种基于电化学聚合信号放大的酶联免疫方法，并应用在乳制品中三聚氰胺的快速、灵敏的定量检测，其特征在于：将三聚氰胺标准品或样品和三聚氰胺抗体放置在包被有三聚氰胺半抗原的多孔酶标板孔中进行竞争免疫反应，形成抗原-抗体复合物后加入酶标二抗与抗体进行反应；在酶标二抗与抗体反应后加入酶促反应底物；酶反应完成后向孔中加入石墨烯作为电解质，并将丝网印刷电极插入其中进行电化学聚合；聚合完成后将电极取出，在电极表面滴加电解质溶液，检测电极表面形成的纳米复合物放大的电化学信号，从而检测样品中三聚氰胺的含量。

2.如权利要求1所述的电化学聚合信号放大的酶联免疫方法，其特征在于：酶标二抗为硝基还原酶标记羊抗兔IgG抗体，可用戊二醛偶联法将硝基还原酶与二抗偶联制得；所述酶促反应底物为硼氢化钠与邻硝基苯酚；在硝基还原酶的催化作用下，硼氢化钠将无法电聚合的邻硝基苯酚还原成可电化学聚合的邻氨基苯酚。

3.如权利要求1所述的电化学聚合信号放大方法，其特征在于：将1mg/mL的石墨烯水溶液加入到酶反应后的溶液中混匀，插入丝网印刷电极，用循环伏安法在－0.2V至1.2V范围内扫描10圈，进行电化学聚合，得到聚邻氨基苯酚-石墨烯纳米复合物膜。

4.如权利要求1所述的所述纳米复合物放大的电化学信号检测方法如下：以0.1mol/L的盐酸溶液为电解质，记录－0.2V至0.3V范围内示差脉冲伏安曲线，检测信号为峰电流值。

5.如权利要求1所述检测样品中三聚氰胺的含量方法为标准曲线法。