[发明专利]农田蜘蛛华丽肖蛸和锥腹肖蛸特异性鉴定引物及鉴定方法

摘要

本发明公开了一种农田蜘蛛华丽肖蛸（Tetragnatha nitens Audouin）和锥腹肖蛸（T. maxillosa Thoren）的特异性鉴定引物，并利用该对引物的扩增产物快速鉴定这两种农田肖蛸属蜘蛛的方法。首先，提取蜘蛛基因组总DNA，以此为PCR模板，通过线粒体COI基因的通用引物对肖蛸属两种蜘蛛进行扩增；其次，依据序列差异各设计一条种特异引物，与通用引物的一条引物混合构成混合引物，再以蜘蛛基因组总DNA为模板进行特异性PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，依据片段长度的大小确定蜘蛛的种类。本发明具有快速、高效和便捷的特点，对鉴定人员的专业知识要求不高；且能对残缺个体进行准确鉴定，比传统的依赖形态特征鉴别更准确可靠。

主权项

一种农田蜘蛛华丽肖蛸和锥腹肖蛸特异性鉴定方法，其特征在于该方法按以下述步骤进行：(1) DNA抽提试剂盒法提取待检测农田蜘蛛华丽肖蛸和锥腹肖蛸的总DNA ；(2) 利用通用引物PCR扩增线粒体COI前部序列；PCR 反应通用引物为：正向引物 COI‑F 如SEQ ID NO:1所示；反向引物 COI‑R 如SEQ ID NO:2所示；(3) 依据COI序列差异分别设计一条反向特异性引物，与正向通用引物混合组成混合引物，分别与两种蜘蛛总基因组DNA进行PCR扩增；PCR 反应特异性引物为：锥腹肖蛸特异引物1Tm‑R如SEQ ID NO:3所示；华丽肖蛸特异引物2Tn‑R如SEQ ID NO:4所示；(4) 扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，100 bp DNA Marker作为参照，进行PCR产物长度的判断，快速确定蜘蛛的种类，根据片段大小判断蜘蛛的种类：锥腹肖蛸为365 bp；华丽肖蛸为576 bp。