[发明专利]一种基于琼枝麒麟菜的细胞杂交栽培方法

摘要

本发明属海洋植物栽培领域，涉及一种基于琼枝麒麟菜的细胞杂交栽培方法，是以野生型和人工养殖琼枝麒麟菜为材料，用果胶酶和鲍鱼消化道粗提酶混合液酶解获得原生质体，经诱导原生质体融合获得杂合细胞，最后通过植物激素诱导培养杂合细胞获得的新植株。本发明工艺简单，可操作性强，利用野生和人工养殖的两类琼枝麒麟菜的原生质体进行融合，获得杂合细胞，再诱导分化出完整植株的细胞杂交技术，获得的新植株具有养殖周期短和抗逆性强的特点，可为琼枝麒麟菜的产业化发展提供技术支持，可有效提高琼枝麒麟菜养殖的经济和生态价值，具有现实意义。

主权项

一种基于琼枝麒麟菜的细胞杂交栽培方法，其特征在于，其步骤如下：1)、原生质体的分离选取野生种和人工养殖种琼枝麒麟菜的新鲜藻体，经消毒灭菌处理后加入混合酶液，在光照≤500lux和温度20‑25℃的条件下，酶解1.5～2h，获得两种琼枝麒麟菜的原生质体；所述混合酶液是指在酶液中含有2％的果胶酶、3.5％的鲍鱼消化道粗提酶和5mmol/L葡萄糖酸钠，pH为6.5；2)、原生质体的融合将分离得到的原生质体，洗涤液洗涤干净，用f/2培养液分别制成原生质体浓度为10⁴～10⁵个/mL的原生质体悬液，再加入CaCl₂.H₂O₂、Mg Cl₂.H₂O₂，使其浓度分别为5mmol/L；然后将两种原生质体悬浮液按1:1比例混合，加入PEG诱导两种原生质体融合；3)、杂种细胞的选择将含融合细胞的原生质体悬液加到培养皿中，40℃保温，加入含0.8％琼脂糖的f/2培养液充分混匀，然后室温冷却凝固；显微镜下识别融合细胞，并做好标记；4)、杂合细胞的培养挑取单个已融合的细胞，用杂合培养液进行培养，直至融合细胞开始分裂并形成2.5～3cm细胞团；所述杂合培养液是以f/2培养液为基础培养液，并添加2,4‑D 0.5μg/L、6‑BA 0.25μg/L、琼胶0.5％；5)、杂合细胞诱导再生植株将形成的细胞团移入诱导培养液中通气培养，诱导细胞团生成新的植株；所述诱导培养液是以f/2培养液为基础培养液，并添加6‑BA 0.25μg/L、IBA0.1μg/L。