[发明专利]硫酸酯化绞股蓝多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种硫酸酯化绞股蓝多糖的制备方法，用于解决现有方法制备的硫酸酯化绞股蓝多糖免疫活性低的技术问题。技术方案是在三口瓶中加入三氧化硫-吡啶和有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺，待其完全溶解后加入绞股蓝多糖粉末，体系置于已经预热好的水浴装置中，恒温反应。结束后待体系冷却至室温，用NaOH溶液调节PH到7.0，加入乙醇过夜沉淀，次日离心，干燥即得硫酸酯化绞股蓝多糖。本发明采用三因素三水平的方法制备得到绞股蓝多糖产品，采用氯化钡-明胶浊度法测其各自的取代度。制备的硫酸酯化绞股蓝多糖产品具有较高的免疫活性。

主权项

一种硫酸酯化绞股蓝多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、在大容器内用95％乙醇浸泡绞股蓝干植物，之后除去乙醇，在旋转蒸发仪上用95％乙醇50℃回流提取2次，每次2h，提取结束后过滤，挥干乙醇，得到的干燥物加超纯水，在大的双口烧瓶中95℃回流提取3次，每次3‑4小时，结束后用双层纱布过滤，收集滤液，50℃减压浓缩，20℃，7000rpm，离心30min后，取上清液，加入4倍体积95％乙醇，4℃沉淀过夜，收集沉淀，离心；沉淀分别用95％乙醇、丙酮、乙醚洗涤，最后冷冻干燥，得到绞股蓝粗多糖粉末；步骤二、将0.5％的绞股蓝粗多糖水溶液用30％浓氨水调节pH值至8.0，在搅拌下,于50℃逐渐加入30％H₂O₂，至溶液为淡黄色，恒温保持2h，用CH₃COOH调节pH值至7.0，减压浓缩；加入4倍上清体积的95％乙醇，4℃过夜，7000rpm，15min离心，收集沉淀，依次用95％乙醇、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥；得到精制绞股蓝多糖；步骤三、用N,N‑二甲基甲酰胺作溶剂，溶解三氧化硫‑吡啶复合物，按照2.5g三氧化硫‑吡啶/20mL的N,N‑二甲基甲酰胺的量加入；之后将精制多糖加入到复合物体系中，用溶剂洗涤烧杯，搅拌溶解后，将体系移入带有温度计和搅拌装置的三颈瓶中，持续搅拌，60℃水浴反应；反应结束后冷却至室温，用5％NaOH调PH到7.0，3倍体积的乙醇4℃沉淀过夜，次日7500rpm，15min离心，蒸馏水透析120h，透析袋截留分子量为3500，冷冻干燥，得到不同取代度的硫酸酯化绞股蓝多糖。