[发明专利]蓝靛果忍冬器官型再生培养方法

摘要

本发明涉及一种蓝靛果忍冬器官型再生培养方法，包括以下步骤：1)外植体灭菌；2)基本培养基；3)附加激素；4)培养条件。本发明是蓝靛果忍冬直接从外植体上再生不定芽的器官型再生培养方法，器官型再生培养方法与器官发生型培养方法相比，减少了由外植体诱导愈伤组织的过程，直接从外植体上再生不定芽，缩短了组织培养的培养周期，节约了组织培养成本，加快了繁殖途径。培养基由大量元素、微量元素和附加激素组成，利用本项发明外植体不形成愈伤组织，直接再生不定芽，分化率达到100％，增殖倍数达到5.5倍，与器官发生型培养方法相比可缩短培养周期20～30天，节约培养基成本10％,其它成本13.3％。

主权项

一种蓝靛果忍冬器官型再生培养方法，其特征是：由以下四个步骤组成：第一步、外植体灭菌蓝靛果忍冬外植体接种至器官型再生培养基之前，外植体采集在6月初进行，外植体应选用定植后一年生或两年生植株新梢的茎尖或茎段，将采集的外植体放入清水中浸泡，加入少量洗衣粉浸泡搅拌2～3min，然后放入流水冲洗4～6h，于超净工作台上用体积百分比浓度为75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，再用质量百分比浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒8～10min，然后用无菌水冲洗6～7次，再接种于器官型再生培养基上；第二步、基本培养基蓝靛果忍冬器官型再生培养基，采用B₅混合培养基作为蓝靛果忍冬器官型再生培养基，基本培养基由大量元素、微量元素组成，为保证铁元素的稳定供应，采用Fe·EDTA形态的铁盐，未采用B₅铁盐成分，其中大量元素由质量百分比浓度为2500mg/L的硝酸钾(KNO₃)，150mg/L的氯化钙(CaCl₂·2H₂O)，250mg/L的硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)，134mg/L的硫酸铵【(NH₄)₂SO₄】，150mg/L的磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·H₂O)组成，微量元素由质量百分比浓度为10mg/L的硫酸锰(MnSO₄·H₂O)，3mg/L的硼酸(H₃BO₃)，2mg/L的硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)，0.75mg/L的碘化钾(KI)，0.25mg/L的钼酸钠(Na₂M_oO₄·2H₂O)，0.025mg/L的硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)，0.025mg/L的氯化钴(CoCl₂·6H₂O)组成，铁盐由质量百分比浓度为27.8mg/L的硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)和质量百分比浓度为37.3mg/L的乙二胺四乙酸二钠(Na₂·EDTA·2H₂O)的螯合剂(NaFe·EDTA)组成，蔗糖30g/L，琼脂粉5～6g/L，pH值5.8～6.2；第三步、附加激素蓝靛果忍冬器官型再生培养基附加激素，由质量百分比浓度为1.0～3.0mg/L的6‑苄基氨基嘌呤(6BA)和质量百分比浓度为0.1～0.3mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成；第四步、培养条件蓝靛果忍冬器官型再生培养方法的培养条件是：培养温度白天为23℃±2℃，夜间不低于15℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为1800～2000Lx，30～35天继代一次。