[发明专利]人铁蛋白轻链重组毕赤酵母的构建及高密度发酵生产方法在审
| 申请号： | 201410640019.2 | 申请日： | 2014-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN104357477A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 沈鹤霄;华权高;杨琥 | 申请（专利权）人： | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京华沛德权律师事务所 11302 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人铁蛋白轻链重组毕赤酵母的构建及高密度发酵生产方法，包括人铁蛋白轻链基因编码序列的合成，经过酶切和连接，克隆至表达载体pPIC9k中，再将重组载体转化至毕赤酵母GS115中，通过筛选得到高水平分泌表达的重组毕赤酵母，然后利用发酵罐实现人铁蛋白轻链在发酵罐中高密度生长并得到高效分泌表达。本发明改变了传统的原核宿主大肠杆菌表达人铁蛋白轻链，通过真核宿主毕赤酵母在发酵罐中的高密度发酵得到了大量人铁蛋白轻链，既保证了人铁蛋白轻链的生物学活性，又节约了成本。 | ||
| 搜索关键词： | 铁蛋白 重组 酵母 构建 高密度 发酵 生产 方法 | ||
【主权项】：
人铁蛋白轻链重组毕赤酵母的构建，其特征在于：1)人铁蛋白轻链基因编码序列的合成：根据人铁蛋白轻链基因编码序列，合成人铁蛋白轻链基因，并在两侧引入酶切位点，回收片段并连接到pet23a载体，得到质粒pet23a/ferritin L，经测序为正确序列；2)真核表达载体的构建：将质粒pet23a/ferritin L和载体Ppic9k经过双酶切后回收，再进行连接，连接完成后转入XL‑GOLD菌株，找到重组子，得到质粒Ppic9k/ferritin L；3)转化真核宿主毕赤酵母：用Sac Ⅰ单酶切质粒Ppic9k/ferritin L线性化后溶液回收，转化到毕赤酵母GS115中，然后筛选重组毕赤酵母，再通过菌落PCR的方法来验证。
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