[发明专利]蛙疱疹病毒1型的LAMP快速检测方法及试剂盒

摘要

本发明蛙疱疹病毒1型的LAMP快速检测方法及试剂盒，属于农业科学生物技术应用领域。所述快速检测方法，包括下述步骤(1)提取待测样本总的DNA核酸作为反应模板；(2)配置LAMP反应溶液，其中LAMP反应溶液由下列体积比的组分组成，Bst DNA聚合酶水霉菌灭菌水2×反应缓冲液引物混合物＝128.612.50.9；(3)将步骤(1)提取的样本总DNA加入到步骤(2)配制的LAMP反应溶液中，混合；(4)在60℃恒温水浴中反应30分钟；(5)诊断结果将步骤(4)扩增反应后产物用电泳检测或荧光染料技术进行鉴定。本方法具有操作简单、低成本，反应快速、特异性强、灵敏度高的优点，且用时短，灵敏度比普通PCR高100倍，对壶菌早期诊断准确性更高的特点。

主权项

用于蛙疱疹病毒1型的LAMP快速检测方法的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由Bst DNA聚合酶、水霉菌、灭菌水、2×反应缓冲液和引物混合物组成，体积比为：Bst DNA聚合酶:水霉菌:灭菌水:2×反应缓冲液:引物混合物＝1:2:8.6:12.5:0.9；其中，所述2×反应缓冲液包括900μL 2×LAMP反应缓冲液和100μL浓度为25mM的dNTP混合液；其中2×LAMP反应缓冲液主要由1M pH8.8Tris‑HCl 40mL，KCl 1.49g，MgSO4 1.93g，(NH4)2SO4 2.64g，Tween20 2mL和Betaine 187.4g组成；其中100μL的dNTP混合液由25μL dATP、25μL dCTP、25μL dGTP和25μL dTTP组成；所述引物混合物由20μL FIP、20μL BIP、2.5μL F3和2.5μL B3组成，其中FIP、BIP、F3和B3的浓度均为100μM；外引物F3序列如SEQ No.2所示，外引物B3序列如SEQ No.3所示，内引物FIP序列如SEQ No.4所示和内引物BIP序列如SEQ No.5所示。