[发明专利]一种电化学适配体传感器、其制备方法及其用途

摘要

本发明涉及一种电化学适配体传感器、其制备方法及其用途，更具体而言，本发明涉及一种基于PdCu@MWCNTs纳米粒子构建的电化学适配体传感器、其制备方法，以及由该方法制备的电化学适配体传感器在测定腺苷中的用途。本发明的电化学适配体传感器表现出优良的准确性、稳定性、重现性与高的灵敏度，对推广适配体传感器在疾病预防、疾病诊断和药物筛选上的实际应用具有重要的意义。

主权项

一种电化学适配体传感器的制备方法，所述电化学适配体传感器包括：工作电极、参比电极和对电极，所述工作电极的基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰金掺杂的石墨烯、硫堇、捕获探针、PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷适配体溶液和不同浓度的腺苷，所述参比电极为饱和甘汞电极，所述对电极为铂丝电极，所述的捕获探针为5’‑CCCAGGTTCTCT‑(CH₂)₆‑NH₂‑3’ (SSDNA1)，腺苷适配体为3’‑SH‑TGGAAGGAGGCGTTATGAGGGGGTCCAAGAGA‑5’ (SSDNA2)；其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：a、制备PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷适配体溶液；b、制备电化学适配体传感器工作电极；c、制作电化学适配体传感器工作曲线；其中，步骤a制备PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷适配体溶液的具体步骤如下：① 将质量比为1:1.6:4的PdCl₂，CuSO₄·5H₂O和L‑谷氨酸混合于烧瓶中，加入40 mL乙二醇（EG），然后在不断搅拌下逐滴加入8 wt% KOH/EG调整溶液pH大约为11，此过程溶液由绿色变为深蓝色； ② 将纯净的多壁碳纳米管加入到上述混合液中，其中，所述多壁碳纳米管与CuSO₄·5H₂O的质量之比为3:2，超声2 h，得到均匀的悬浮液；③ 将所得到的混合溶液转移到50 mL高压釜中，在160 ℃下加热6 h，然后冷却至室温，离心洗涤数次后，将固体于40 ℃真空干燥8 h，即可得到PdCu@MWCNTs黑色固体粉末；④ 分别配制1 mg/mL的上述PdCu@MWCNTs、HRP和GO_X溶液；用Tris‑HCl配制5µmol/L腺苷适配体(SSDNA2)，然后取等体积的SSDNA2 (5µmol/L)，PdCu@MWCNTs (1 mg/mL)，HRP(1 mg/mL)和GO_X(1 mg/mL)混合后放在4 ℃下震荡24 h，得到PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷适配体溶液；步骤b制备电化学适配体传感器工作电极的具体步骤如下：① 将玻碳电极表面进行抛光处理使其表面光洁；② 配制浓度为2 mg/mL的金掺杂的石墨烯溶液，然后将所述金掺杂的石墨烯溶液滴到电极上，室温晾干；③ 将0.5 mg/mL的硫堇溶液滴到电极表面，室温晾干；④ 用Tris‑HCl配制5µmol/L捕获探针(SSDNA1)，然后将其滴到电极表面，将电极在4 ℃放置2 h；⑤ 将孵化好的PdCu@MWCNTs/HRP/GO_X/腺苷适配体溶液修饰到电极上，在4 ℃放置4 h；⑥ 再滴上一系列不同浓度的腺苷溶液，在4 ℃保存晾干，即得到电化学适配体传感器的工作电极；步骤c制作电化学适配体传感器工作曲线的具体步骤如下：① 将作为参比电极的饱和甘汞电极、作为对电极的铂丝电极和上述制备的工作电极正确连接在电化学工作站上；② 含有浓度为1 mmol/L葡萄糖的pH 8.0的PBS缓冲溶液作为底液，通过方波伏安法(SWV)检测工作电极的电流；根据电流响应的差值(不加腺苷溶液和加入腺苷溶液)与腺苷标准溶液浓度的关系，绘制工作曲线。