[发明专利]一种反刍动物内源氮排泄量的测定方法

摘要

本发明公开了一种反刍动物内源氮排泄量的测定方法，其步骤：A、选择C3植物饲料原料，配制饲料；B、实现C3植物中自然富集的¹³C在试验山羊机体组织稳定标记，安装十二指肠近段和回肠末端瘘管；C、在饲料中添加三氧化二铬作为食糜标记物，连续饲喂；D、连续饲喂添加三氧化二铬饲料，采集饲料、颈静脉血、十二指肠食糜、回肠食糜、粪样；E、测定饲料、十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中干物质、氮含量、铬浓度和¹³C丰度；F、根据氮表观消化率和真消化率的计算公式的差异，推导出内源氮排泄量计算公式，计算不同部位内源氮排泄量。方法易行，操作简单、准确并能测定动物内源氮排泄量。测定成本低廉；在反刍动物正常生理状态下测定，测定结果准确。

主权项

一种反刍动物内源氮排泄量的测定方法，其步骤是：A、选择C3植物饲料原料，根据山羊营养需要量配制饲料，试验山羊饲料参考中华人民共和国农业行业标准‑肉羊饲养标准配制，以1.3倍维持需要量设计饲料配方，试验山羊连续饲喂11－13周；B、实现C3植物中自然富集的¹³C在试验山羊机体组织稳定标记，随后安装十二指肠近段和回肠末端瘘管，确定试验山羊机体组织¹³C稳定标记时间：分别在试验山羊饲喂0、4、8、12、16周时通过颈静脉采血，分离血浆，利用同位素质谱仪分析血浆中¹³C丰度，并与饲料中¹³C丰度进行比较，确定饲料中植物自然富集的¹³C在山羊机体组织内稳定标记的时间；C、安装试验山羊十二指肠近段和回肠末端瘘管：试验山羊饲喂12周后，分别在十二指肠近段:距幽门4‑5cm和回肠末端:距回盲端8‑10cm安装T型瘘管，并连续10天肌肉注射青霉素和链霉素进行护理，确保试验山羊创口恢复良好，采食量恢复到术前水平；D、在饲料中按3－5克/天添加三氧化二铬作为食糜标记物，连续饲喂5－10天；并在饲喂添加三氧化二铬饲料一周内的第5‑7天，分别在不同时间点采集饲料、颈静脉血、十二指肠食糜、回肠食糜和粪样，采样时间如下：第5d：01:00、07:00、13:00、19:00；第6d：03:00、09:00、15:00、21:00；第7d：05:00、11:00、17:00、23:00；E、测定饲料、十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中干物质、氮含量和铬浓度，分离饲料样中游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度，分离十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中微生物，将分离微生物后的食糜进一步分离游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；F、样品处理：分别采集饲料、颈静脉血、十二指肠食糜、回肠食糜、粪样，测定饲料中干物质和氮含量；测定十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中干物质、氮和铬的含量；分离饲料样中游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；分离十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中微生物，将分离微生物后的食糜进一步分离游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；根据氮表观消化率和真消化率的计算公式的差异，计算出山羊消化道不同部位内源氮排泄量；G、根据氮表观消化率和真消化率的计算公式的差异，推导出内源氮排泄量计算公式，计算山羊消化道不同部位内源氮排泄量，消化道不同部位内源氮排泄量计算公式如下：(1)瘤胃内源氮排泄量计算公式$\mathrm{ENR}=\frac{\mathrm{Nduo}}{\mathrm{Crduo}}\×\frac{13\mathrm{Cduo}-13\mathrm{Cfeed}}{13\mathrm{Cpla}-13\mathrm{Cfeed}}$(2)小肠内源氮排泄量计算公式$\mathrm{ENSI}=\frac{\mathrm{Nile}}{\mathrm{Crile}}\×\frac{13\mathrm{Cile}-13\mathrm{Cduo}}{13\mathrm{Cpla}-13\mathrm{Cduo}}$(3)大肠内源氮排泄量计算公式$\mathrm{ENLI}=\frac{\mathrm{Nfec}}{\mathrm{Crfec}}\×\frac{13\mathrm{Cfec}-13\mathrm{Cile}}{13\mathrm{Cpla}-13\mathrm{Cile}}$(4)肠道内源氮排泄量计算公式$\mathrm{ENIT}=\frac{\mathrm{Nfec}}{\mathrm{Crfec}}\×\frac{13\mathrm{Cfec}-13\mathrm{Cduo}}{13\mathrm{Cpla}-13\mathrm{Cduo}}$(5)胃肠道内源氮排泄量计算公式$\mathrm{ENGT}=\frac{\mathrm{Nfee}}{\mathrm{Grfec}}\×\frac{13\mathrm{Cfec}-13\mathrm{Cfeed}}{13\mathrm{Cpla}-13\mathrm{Cfeed}}$式中，ENR、ENSI、ENLI、ENIT、ENGT分别表示瘤胃、小肠、大肠、全肠道、胃肠道内源氮排泄量；Nduo、Nile、Nfec分别表示十二指肠、回肠、粪样食糜中N含量；Crduo、Crile、Crfec分别表示十二指肠食糜、回肠食糜、粪样中Cr含量；13Cduo、13Cile、13Cfec分别表示分离微生物后的十二指肠食糜、回肠食糜、粪样游离氨基酸中¹³C丰度；13Cfeed、13Cpla分别表示饲料、血浆游离氨基酸中¹³C丰度；H、测定结果：测定结果与稳定性同位素¹⁵N标记法测定结果接近，稳定性同位素¹⁵N标记法是目前准确的测定方法，测定结果准确。