[发明专利]一种反刍动物内源氮排泄量的测定方法

权利要求书

1.一种反刍动物内源氮排泄量的测定方法，其步骤是：

A、选择C3植物饲料原料，根据山羊营养需要量配制饲料，试验山羊饲料参考中华人民 共和国农业行业标准-肉羊饲养标准配制，以1.3倍维持需要量设计饲料配方，试验山羊连续 饲喂11－13周；

B、实现C3植物中自然富集的¹³C在试验山羊机体组织稳定标记，随后安装十二指肠近 段和回肠末端瘘管，确定试验山羊机体组织¹³C稳定标记时间：分别在试验山羊饲喂0、4、8、 12、16周时通过颈静脉采血，分离血浆，利用同位素质谱仪分析血浆中¹³C丰度，并与饲料 中¹³C丰度进行比较，确定饲料中植物自然富集的¹³C在山羊机体组织内稳定标记的时间；

C、安装试验山羊十二指肠近段和回肠末端瘘管：试验山羊饲喂12周后，分别在十二指 肠近段:距幽门4-5cm和回肠末端:距回盲端8-10cm安装T型瘘管，并连续10天肌肉注射青 霉素和链霉素进行护理，确保试验山羊创口恢复良好，采食量恢复到术前水平；

D、在饲料中按3－5克/天添加三氧化二铬作为食糜标记物，连续饲喂5－10天；并在饲 喂添加三氧化二铬饲料一周内的第5-7天，分别在不同时间点采集饲料、颈静脉血、十二指 肠食糜、回肠食糜和粪样，采样时间如下：

第5d：01:00、07:00、13:00、19:00；

第6d：03:00、09:00、15:00、21:00；

第7d：05:00、11:00、17:00、23:00；

E、测定饲料、十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中干物质、氮含量和铬浓度，分离饲料样 中游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度，分离十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中微生物， 将分离微生物后的食糜进一步分离游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；

F、样品处理：分别采集饲料、颈静脉血、十二指肠食糜、回肠食糜、粪样，测定饲料中 干物质和氮含量；测定十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中干物质、氮和铬的含量；分离饲料 样中游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；分离十二指肠食糜、回肠食糜和粪样中微生 物，将分离微生物后的食糜进一步分离游离氨基酸，测定游离氨基酸中¹³C丰度；根据氮表 观消化率和真消化率的计算公式的差异，计算出山羊消化道不同部位内源氮排泄量；

G、根据氮表观消化率和真消化率的计算公式的差异，推导出内源氮排泄量计算公式， 计算山羊消化道不同部位内源氮排泄量，消化道不同部位内源氮排泄量计算公式如下：

(1)瘤胃内源氮排泄量计算公式

ENR=NduoCrduo×13Cduo-13Cfeed13Cpla-13Cfeed]]>

(2)小肠内源氮排泄量计算公式

ENSI=NileCrile×13Cile-13Cduo13Cpla-13Cduo]]>

(3)大肠内源氮排泄量计算公式

ENLI=NfecCrfec×13Cfec-13Cile13Cpla-13Cile]]>

(4)肠道内源氮排泄量计算公式

ENIT=NfecCrfec×13Cfec-13Cduo13Cpla-13Cduo]]>

(5)胃肠道内源氮排泄量计算公式

ENGT=NfeeGrfec×13Cfec-13Cfeed13Cpla-13Cfeed]]>

式中，ENR、ENSI、ENLI、ENIT、ENGT分别表示瘤胃、小肠、大肠、全肠道、胃肠 道内源氮排泄量；Nduo、Nile、Nfec分别表示十二指肠、回肠、粪样食糜中N含量；Crduo、 Crile、Crfec分别表示十二指肠食糜、回肠食糜、粪样中Cr含量；13Cduo、13Cile、13Cfec 分别表示分离微生物后的十二指肠食糜、回肠食糜、粪样游离氨基酸中¹³C丰度；13Cfeed、 13Cpla分别表示饲料、血浆游离氨基酸中¹³C丰度；

H、测定结果：测定结果与稳定性同位素¹⁵N标记法测定结果接近，稳定性同位素¹⁵N标 记法是目前准确的测定方法，测定结果准确。

2.根据权利要求1所述的一种测定反刍动物消化道不同部位内源氮排泄量的方法，其特 征在于：所述的山羊营养配制饲料组成如下：水稻秸秆45.0％、糙米33.99％、豆粕9.02％、 大豆油8.76％、碳酸钙0.08％、磷酸氢钙0.65％、氯化钠0.50％、预混料2.0％。