[发明专利]葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明公开了葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。以葡萄糖为原料，合成了一系列不同结构的葡萄糖衍生物阳离子脂质：di‑C₁₂‑Glu‑TMA、di‑C₁₂‑Glu‑TMA、di‑C₁₂‑Glu‑TMA、di‑C₁₂‑Glu‑TMA、Glu‑DiC₁₂MA、Glu‑DiC₁₄MA、Glu‑DiC₁₆MA和Glu‑DiC₁₈MA。上述脂质体经水分散后得到一系列具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，能实现核酸药物从胞外到胞内的转运，亦可用于非核酸药物的转运载体。

主权项

1.一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：(1)以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为酰化剂及反应溶剂，经酸催化乙酰化反应，经结晶纯化处理得到白色粉末状固体1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖；(2)以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1‑O‑乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖；(3)以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾为催化剂，2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃葡萄糖与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；(4)以无水二氯甲烷为溶剂，三氟甲磺酸三甲基硅酯(简称为TMSOTf)为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3‑氯‑1‑丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’‑氯丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(5)以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，3’‑氯丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’‑叠氮基丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(6)以甲醇为溶剂，3’‑叠氮基丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑叠氮基丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(7)室温下，以浓硫酸为催化剂，步骤(6)所得产物与2,2‑二甲氧基丙烷反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑叠氮基丙基4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(8)以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，月桂基溴、肉豆蔻基溴、鲸蜡基溴和硬脂基溴分别与3’‑叠氮基丙基4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化分别得到3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(9)以甲醇为溶剂，3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑4,6‑O‑异丙叉基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷分别与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化分别得到3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(10)以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷分别与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化分别得到3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷和3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷；(11)步骤(10)得到的3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷和3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷分别与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化分别得到白色固体3’‑(N,N,N‑三甲基碘化铵基)丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑(N,N,N‑三甲基碘化铵基)丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑(N,N,N‑三甲基碘化铵基)丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷、3’‑(N,N,N‑三甲基碘化铵基)丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑β‑D‑吡喃葡萄苷；(12)以步骤(6)得到的3’‑叠氮基丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’‑氨基丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(13)以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’‑氨基丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷分别与月桂基溴、肉豆蔻基溴、鲸蜡基溴和硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化分别得到无色油状物3’‑(N,N‑二正十二烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N,N‑二正十四烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N,N‑二正十六烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑(N,N‑二正十八烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(14)步骤(13)得到的3’‑(N,N‑二正十二烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N,N‑二正十四烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N,N‑二正十六烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷和3’‑(N,N‑二正十八烷基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷分别与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化分别得到白色固体3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十二烷基碘化铵基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十四烷基碘化铵基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十六烷基碘化铵基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷、3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十八烷基碘化铵基)丙基β‑D‑吡喃葡萄糖苷；(15)步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。