[发明专利]一种制备BMP‑2蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种制备BMP‑2蛋白的方法。本发明提供的制备BMP‑2蛋白的方法，包括如下步骤将种子液接种至发酵培养基，然后按照如下参数进行发酵37.0℃；溶氧>40％；pH7.0‑7.3；起始溶氧>90％；200rpm；起始通气量3.0SLPM；采用补料培养基进行补料；待发酵体系的OD600nm值为9时加入IPTG并使其浓度为1.0mM，然后按如下参数进行诱导发酵4‑6小时37.0℃；溶氧>40％；pH7.20‑7.40；BMP‑2蛋白如序列表的序列1所示；所述重组菌的制备方法如下将具有所述BMP‑2蛋白的编码基因的重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。本发明提供的方法具备产业化价值。

主权项

一种制备BMP‑2蛋白的方法，包括如下步骤：将种子液按10％的体积比接种至装有发酵培养基的发酵罐，然后按照如下参数进行第一阶段发酵：培养温度：37.0℃；培养阶段溶氧：>40％；培养pH：7.0‑7.3；接种种子液后的起始溶氧：>90％；接种种子液后的起始转速：200rpm；接种种子液后的起始通气量：3.0SLPM；待发酵体系的OD600nm值为9时加入IPTG并使其浓度为1.0mM，然后按如下参数进行第二阶段发酵，第二阶段发酵即诱导发酵：诱导温度：37.0℃；诱导发酵阶段溶氧：>40％；诱导发酵阶段pH：7.20‑7.40；诱导发酵时间：4‑6小时；包括第一阶段发酵和第二阶段发酵在内的发酵过程中，采用补料培养基进行补料；所述方法中，“采用补料培养基进行补料”的方案如下：对于装有3L所述发酵培养基的5L发酵罐来说，从发酵体系OD600nm＝1.5开始补料，初始补料速度为2ml/min，每半小时增加0.4ml/min，增加至6ml/min后再每半小时减少0.4ml/min，直至补料速度为0；所述方法中，“采用补料培养基进行补料”的方案如下：对于装有30L所述发酵培养基的50L发酵罐来说，从发酵体系OD600nm＝1.5开始补料，初始补料速度为12ml/min，每半小时增加2.4ml/min，增加至36ml/min后再每半小时减少2.4ml/min，直至补料速度为0；所述BMP‑2蛋白如序列表的序列1所示；所述种子液为OD600nm值＝3.0‑5.0的重组菌菌液；所述重组菌的制备方法如下：将具有所述BMP‑2蛋白的编码基因的重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌；所述发酵培养基由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下：1.0g/100mL胰蛋白胨、0.5g/100mL酵母粉、0.5g/100mL NaCl、0.1g/100mL MgSO4、0.05g/100mL CaCl2、0.5g/100mL Na2HPO4和0.25g/100mL KH2PO4；所述补料培养基由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下：40g/L甘油、30g/L蛋白胨和15g/L酵母粉。