[发明专利]同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法

摘要

本发明涉及一种同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法，该方法以微乳液作为流动相的高效液相色谱法，微乳流动相中水相的比例一般都在90%以上，与目前常规高效液相色谱法中流动相相比大大减少了有机溶剂的使用，大大降低了对身体的危害、环境的污染和分析的时间和成本。通过对微乳色谱条件的优化，在等度洗脱条件下，大花罗布麻叶中6种黄酮类成分同时得到了有效的分离，建立了一种绿色环保、准确可靠、稳定的快速检测方法。克服了现有大花罗布麻叶黄酮类成分测定中的缺陷。

主权项

一种同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法，其特征在于按下列步骤进行：a、样品溶液制备：称取真空干燥至恒重的大花罗布麻叶粉末0.5g，精密称定，过3号筛，加入 40 mL浓度为70%乙醇，浸泡 1 h，超声处理 30 min，放冷，滤过，准确移取续滤液 2mL，置 10 mL容量瓶中，以 浓度为70% 乙醇定容，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤 ，取续滤液，即得样品溶液；b、对照品溶液制备：称取真空干燥至恒重的槲皮素‑3‑O‑槐糖苷、罗布麻甲素、槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷和三叶豆苷对照品适量，分别加入浓度为70%乙醇超声溶解后，转移至25 mL 容量瓶中，定容，摇匀，作为对照品贮备液，密封，温度4℃保存；c、微乳流动相配制：将体积分数2.0 %表面活性剂Genapol X‑080，体积分数3.0%助表面活性剂正丁醇，体积分数0.6%油相乙酸乙酯，体积分数0.2%三乙胺和94. 2% 水溶液混合，用20mM H₃PO₄调节pH =5.0，超声 30 min，经 0.45μm 滤膜过滤，超声 30 min，即得透明稳定的微乳溶液，静置过夜，备用；d、色谱条件：色谱柱为Zorbax SB‑C₁₈  4.6mm×150mm，5μm柱，流速 0.8 mL/min，检测波长 360 nm，柱温30℃，流动相为2.0% Genapol X‑080‑3.0%正丁醇‑0.6% 乙酸乙酯 ‑0.2% 三乙胺‑94. 2% 水溶液，用20mM H₃PO₄调节pH =5.0，进样量 10μL，采用外标法定量，色谱图记录与处理由工作站完成，理论塔板数按罗布麻甲素峰计算不低于8000。