[发明专利]同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法

权利要求书

1.一种同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、样品溶液制备：称取真空干燥至恒重的大花罗布麻叶粉末0.5g，精密称定，过3号筛，加入 40 mL浓度为70%乙醇，浸泡 1 h，超声处理 30 min，放冷，滤过，准确移取续滤液 2mL，置 10 mL容量瓶中，以 浓度为70% 乙醇定容，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤 ，取续滤液，即得样品溶液；

b、对照品溶液制备：称取真空干燥至恒重的槲皮素-3-O-槐糖苷、罗布麻甲素、槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷和三叶豆苷对照品适量，分别加入浓度为70%乙醇超声溶解后，转移至25 mL 容量瓶中，定容，摇匀，作为对照品贮备液，密封，温度4℃保存；

c、微乳流动相配制：将体积分数2.0 %表面活性剂Genapol X-080，体积分数3.0%助表面活性剂正丁醇，体积分数0.6%油相乙酸乙酯，体积分数0.2%三乙胺和94. 2% 水溶液混合，用20mM H₃PO₄调节pH =5.0，超声 30 min，经 0.45μm 滤膜过滤，超声 30 min，即得透明稳定的微乳溶液，静置过夜，备用；

d、色谱条件：色谱柱为Zorbax SB-C₁₈  4.6mm×150mm，5μm柱，流速 0.8 

mL/min，检测波长 360 nm，柱温30℃，流动相为2.0% Genapol X-080-3.0%正丁醇-0.6% 乙酸乙酯 -0.2% 三乙胺-94. 2% 水溶液，用20mM H₃PO₄调节pH =5.0，进样量 10μL，采用外标法定量，色谱图记录与处理由工作站完成，理论塔板数按罗布麻甲素峰计算不低于8000。