[发明专利]同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种利用HPLC同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分的方法。

背景技术

大花罗布麻(Poacynum hedersonni(Hook.F.)Woodson)是夹竹桃科白麻属植物，学名大叶白麻，药用部位是叶，主要分布在我国新疆地区，是生长在盐碱、沙荒地区及戈壁滩上的多年生宿根植物资源，其独特的生长环境使其具有十分特异的药用保健功效。新疆大花罗布麻入药已有千年历史，其部分药理作用很早就被人们发现并用于临床，据《本草纲目》、《救荒本草》记载，其罗布麻叶有清热利尿、平肝、安神等功效，临床用于治疗高血压、冠心病、颈椎病、肾炎浮肿、神经衰弱、更年期综合征等疾病，1977年正式录入《中华人民共和国药典》。现代药理学研究证明黄酮类物质为大花罗布麻叶最主要的有效成分，大花罗布麻叶中黄酮类物质主要是槲皮素-3-O-槐糖苷、罗布麻甲素、槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷和三叶豆苷等6种黄酮类成分。随着大花罗布麻叶在临床上广泛应用，非常有必要对其中黄酮类成分进行含量测定及分析，这有助于大花罗布麻叶的质量控制，亦为今后对大花罗布麻的进一步研究奠定基础。目前国内外对大花罗布麻叶黄酮类成分的检测方法主要是分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)。

分光光度法测定的是大花罗布麻叶总黄酮的含量，但这只能粗略反映大花罗布麻叶中含黄酮类成分的总量，不能反映大花罗布麻叶各黄酮类成分的情况，无法用来评价大花罗布麻叶质量的真实性、优良性和稳定性。近年来，随着中药物质基础、药理活性研究的深入和现代分离技术的提高，中药质量水平有了明显的提高。在认识到中药药效是多靶点、多成分的协同作用特点后，多指标成分定量成为中药含量测定的发展趋势。而目前有关高效液相色谱法测定大花罗布麻叶黄酮成分的文献中，只有对大花罗布麻叶黄酮类物质中的个别成分进行了测定，而没有同时对槲皮素-3-O-槐糖苷、罗布麻甲素、槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷和三叶豆苷等多种黄酮类成分进行测定，因而无法全面的反映大花罗布麻叶黄酮类成分，进而也就无法反映大花罗布麻叶的质量情况。同时还由于各黄酮类成分之间物理化学性质的较大差异，现有的HPLC分离方法均存在分离选择性小，分离度差和分离时间长的缺点。另外，目前的HPLC分离方法中流动相含有高比例的甲醇或乙腈，这对身体及环境也是十分有害的。因而，建立一种绿色环保高效的分析测定大花罗布麻叶中多种黄酮类成分的方法具有重要意义。

微乳液相色谱(microemulsion liquid chromatography，MELC)法是以微乳为流动相的高效液相色谱法。微乳流动相通常是由水相、油相、表面活性剂和助表面活性剂组成，是一种透明或半透明的，低粘度的，各向同性且热力学稳定的水油混合系统，粒径小于100nm。MELC法与常规HPLC法相比，具有不使用或极少使用有机溶剂、分离效率高和分离速度快的优势，可用于复杂样品的分离，复杂样品经过简单的稀释后便可以直接进样分析，无需预处理。在低紫外波长(200nm)检测方面有明显的优势。

本发明建立了一种以微乳液作为流动相的高效液相色谱法(即微乳液相色谱(MELC))对大花罗布麻叶中槲皮素-3-O-槐糖苷、罗布麻甲素、槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷和三叶豆苷等6种黄酮类成分同时进行含量测定，并应用该方法分别对6批样品进行分析，进而比较不同批次大花罗布麻叶药材在化学成分组成和含量上的异同，为临床上大花罗布麻叶药材的应用提供更好的理论指导。

发明内容

本发明目的在于，提供一种同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法，该方法以微乳液作为流动相的高效液相色谱法，微乳流动相中水相的比例一般都在90％以上，与目前常规高效液相色谱法中流动相相比大大减少了有机溶剂的使用，大大降低了对身体的危害、环境的污染和分析的时间和成本。通过对微乳色谱条件的优化，在等度洗脱条件下，大花罗布麻叶中6种黄酮类成分同时得到了有效的分离，建立了一种绿色环保、准确可靠、稳定的快速检测方法。克服了现有大花罗布麻叶黄酮类成分测定中的缺陷。

本发明所述的一种同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的HPLC方法，按下列步骤进行：

a、样品溶液制备：称取真空干燥至恒重的大花罗布麻叶粉末0.5g，精密称定，过3号筛，加入40mL浓度为70％乙醇，浸泡1h，超声处理30min，放冷，滤过，准确移取续滤液2mL，置10mL容量瓶中，以浓度为70％乙醇定容，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得样品溶液；