[发明专利]一次复合PCR反应鉴定大麻植物化学型的方法

摘要

本发明公开了一种一次复合PCR反应鉴定大麻植物化学型的方法，该方法包括以下步骤：1)大麻植物基因组DNA提取；2)复合PCR引物设计：3)PCR反应体系配置；4)PCR扩增；5)琼脂糖电泳；6)PCR产物电泳条带观察及化学型判断。通过一次复合PCR反应，毒品型大麻可以扩增出约550bp大小的特异性THC条带，纤维型大麻可以扩增出约1050bp大小的特异性CBD条带，而中间型大麻可以同时扩增出上述550bp和1050bp大小的两条条带，通过扩增条带情况，可直观地判断出应试大麻样品的化学型分离。该方法不受传统化学检测中取样时间、取样部位等约束，具有操作简单、周期短、成本低廉等特点，能够对大麻植株化学型进行快速鉴定，可供公安毒品检测部门、农业育种部门等使用，具有良好的应用前景。

主权项

一种一次复合PCR反应鉴定大麻植物化学型的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)大麻植物基因组DNA提取：采用植物常规CTAB法来提取大麻基因组DNA，提取对象可以为大麻任何生长环境下的任何生长时期、任何组织，提取的基因组DNA用于后续PCR反应中的模板；2)复合PCR引物设计：合成三条引物，序列分别为：A引物5′‑AGTTGGCTTGCAGATTCGAACTCG‑3′，B引物5′‑GGAAAAATTGAAGAGAAGTAACCA‑3′，C引物5′‑GCCTTGCTTCTCCCAACTACATA‑3′；3)PCR反应体系配置：总体积25μL，引物A为0.5μL、B为1.0μL、C为1.0μL，引物母液均为10μmol/L；dNTP为2.0μL，母液为10mmol/L；模板DNA为20～100ng，TaqDNA聚合酶为1.0U，含Mg²⁺的Buffer为2.5μL，其余用去离子水补齐；4)PCR扩增：将配置好的PCR体系放到PCR仪器中运行，运行条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，59℃退火45s，72℃延伸90s，35个循环；72℃延伸7min；5)琼脂糖电泳：PCR反应结束后，取反应液3～8μL在1.5％的琼脂糖凝胶上电泳，电泳条件为：恒电压80～120V电泳20min；6)PCR产物观察及化学型判断：将电泳结束后的凝胶在紫外成像仪下观察，当材料为毒品型大麻时，AB引物可特异扩增出大小约550bp的标记条带；当材料为纤维型时，AC引物可特异扩增出大小约1050bp的标记条带；而当材料为中间型时，可同时扩增出约550bp和1050bp大小的两个标记。