[发明专利]不依赖生物工程酶的快速分子克隆方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种不依赖生物工程酶的快速分子克隆方法。该不依赖生物工程酶的快速分子克隆方法包括以下步骤a、引物设计和合成；分别设计和合成两对引物，第一对为目的基因正向引物IF和目的基因反向引物IR，第二对为载体正向引物VF和载体反向引物VR；b、进行PCR，分别获得线性目的基因和线性目的载体DNA；c、将两次PCR产物混合放置，使线性目的基因和线性目的载体DNA自发连接成环状，得到含有目的基因的载体。本发明不依赖生物工程酶的快速分子克隆方法与传统的分子克隆技术相比较，具有高速、高效、低成本，随机误差低等优点。具有广阔的应用前景。

主权项

不依赖生物工程酶的快速分子克隆方法，其特征在于包括以下步骤：a、引物设计和合成；分别设计和合成两对引物，第一对为目的基因正向引物IF和目的基因反向引物IR，第二对为载体正向引物VF和载体反向引物VR；目的基因正向引物IF和目的基因反向引物IR中，目的基因正向引物IF含有Overlap I1引物和I2引物两部分，Overlap I1引物部分的序列与目的载体插入位置的5’端的12‑21个碱基的序列相同，I2引物部分的序列与目的基因5’端10‑30个碱基的序列相同；IR同样含有两个部分，分别为Overlap I3引物和I4引物，Overlap I3引物的序列与载体插入位置3’端序列12‑21个碱基序列反向互补，I4与目的基因3’端10‑30个碱基的序列反向互补；载体正向引物VF和载体反向引物VR是以载体的5’至3’方向为参考，VF与载体待插入位置3’端24‑30个碱基序列相同，VR与载体待插入位置5’端24‑30个碱基序列反向互补；b、进行PCR，分别获得线性目的基因和线性目的载体DNA；c、将两次PCR产物混合放置，使线性目的基因和线性目的载体DNA自发连接成环状，得到含有目的基因的载体。