[发明专利]一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法

摘要

本发明属于免疫学检测技术领域，主要涉及水样中重金属镉离子污染的免疫学定量检测，具体涉及一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法，将水样中的Cd2+与过量EDTA鳌合形成Cd2+-EDTA鳌合物；水样中的Cd2+-EDTA鳌合物与已经包被在酶标板上的Cd2+-ITCBE-OVA竞争Cd2+-EDTA单克隆抗体的抗原结合位点，添加HRP标记的羊抗鼠IgG和底物显色液，终止显色后，酶标仪读取A450nm值，与标准曲线对照，即可得出水样中Cd2+浓度，待检水样处理方法简单，检测过程不需大型仪器设备，操作简便、快速、样品检测量大、时效性强、检测成本低、便于推广；检测结果准确性高、重复性好，检测范围为5.0～512μg/L。

主权项

一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法，其特征在于：具体方法如下：1）取10mL水样加入30mg EDTA钠盐，充分溶解，NaOH调节pH值为6.0，室温反应24小时；2）在酶标板上加入浓度为1.0μg/mL的Cd2+‑ITCBE‑OVA，每孔50μL，37℃温育2小时，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；3）用5%猪血清封闭酶标孔，每孔250μL，37℃温育1小时，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；4）每孔加入50μL工作浓度的Cd2+‑EDTA单抗，同时加入等体积的待测样品及不同浓度的Cd2+标准品与EDTA的鳌合物，设阴性和空白对照，37℃温育15分钟，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；5）加入工作浓度的HRP标记的羊抗鼠IgG，每孔50μL，37℃温育25分钟，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；6）加入TMB底物液，每孔100μL，室温显色5分钟；7）加入终止液，每孔100μL，酶标仪读取A450nm值；8）结果判定：以吸光率B/B0为纵坐标，B是Cd2+不同浓度时Cd2+‑EDTA的A450nm值，B0是Cd2+0浓度时Cd2+‑EDTA的A450nm值，以不同标准品浓度的对数值为横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，进行回归分析，根据各样品的B/B0值在标准曲线上求出其对应的质量浓度。