[发明专利]一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学检测技术领域，主要涉及水样中重金属镉离子污染的免疫学定量检测，具体涉及一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法。

背景技术

随着工业的发展，重金属镉(cadmium, Cd)已成为环境污染的公害之一。环境中Cd主要以离子形式（Cd²⁺）存在，对人体具有肾脏、骨骼、肺脏、心血管等毒性作用和致癌、致畸、致突变等危害作用。因此，Cd²⁺污染的检测技术成为国内外学者的研究热点之一。

目前Cd²⁺污染的检测主要有传统的理化检测和免疫学检测两种类型的方法。理化检测是目前Cd²⁺污染检测的主要方法，灵敏度高，结果准确，但由于存在需要昂贵的仪器设备、熟练的专业人员、烦琐费时、周期长、费用高、不能现场操作、样品筛检量小等缺陷，其应用受到了限制。Cd²⁺污染免疫检测是一种新型的分析方法，是以抗原抗体的特异性反应为基础的分析技术，与理化分析方法相比，具有省时省力、费用低廉、快速、敏感、特异、筛检量大、便于携带、操作简便等优点，代表着今后重金属污染检测的发展趋势。

本发明通过研制出水样中Cd²⁺污染快速定量检测产品，旨在建立方便、快捷、有效的环境水样Cd²⁺污染监督检测技术体系，对保障生态环境及公共卫生安全具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足而提供一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法，该方法检测结果准确性高、重复性好，检测成本低。

本发明的目的是这样实现的：

水样中Cd²⁺污染阻断ELISA快速定量检测法的原理是：将水样中的Cd²⁺与过量EDTA鳌合形成Cd²⁺-EDTA鳌合物；水样中的Cd²⁺-EDTA鳌合物与已经包被在酶标板上的Cd²⁺-ITCBE-OVA竞争Cd²⁺-EDTA单克隆抗体的抗原结合位点，添加HRP标记的羊抗鼠IgG和底物显色液，终止显色后，酶标仪读取A_450nm值，与标准曲线对照，即可得出水样中Cd²⁺浓度。

本发明选用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE）为双功能鳌合剂鳌合Cd²⁺形成Cd²⁺鳌合物半抗原，并将其耦连到牛血清蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)上形成Cd²⁺-ITCBE-BSA和Cd²⁺-ITCBE-OVA两种完全抗原，用Cd²⁺-ITCBE-BSA为免疫原免疫Balb/C小鼠，用Cd²⁺-ITCBE-OVA为检测抗原，通过细胞融合技术，以间接ELISA和阻断ELISA筛选建立抗Cd²⁺-EDTA的杂交瘤细胞系，体内诱生腹水法制备Cd²⁺-EDTA单抗，以制备的高亲和力配对单抗为核心试剂，研制出环境水样中Cd²⁺污染阻断ELISA快速定量检测方法。本发明的标准曲线回归方程为y＝－31.796x＋89.63，R²＝0.9902，IC₅₀为17.78μg/L，检测范围为5.0～512μg/L。

一种水样中镉离子污染阻断ELISA检测法，具体方法如下：

1）取10mL水样加入30mg EDTA钠盐，充分溶解，NaOH调节pH值为6.0，室温反应24小时；

2）在酶标板上加入浓度为1.0μg/mL的Cd²⁺-ITCBE-OVA，每孔50μL，37℃温育2小时，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；

3）用5%猪血清封闭酶标孔，每孔250μL，37℃温育1小时，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；

4）每孔加入50μL工作浓度的Cd²⁺-EDTA单抗，同时加入等体积的待测样品及不同浓度的Cd²⁺标准品与EDTA的鳌合物，设阴性和空白对照，37℃温育15分钟，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；

5）加入工作浓度的HRP标记的羊抗鼠IgG，每孔50μL，37℃温育25分钟，PBST洗板3次，每次间隔3分钟；

6）加入TMB底物液，每孔100μL，室温显色5分钟；