[发明专利]用于提取家禽DNA的细胞裂解液、试剂盒和方法有效
| 申请号： | 201410403604.0 | 申请日： | 2014-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN104152438B | 公开（公告）日： | 2017-05-17 |
| 发明（设计）人： | 王也;刘显庆;刘益平;金洁;卿莹;朱庆 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司11246 | 代理人： | 裴娜 |
| 地址： | 625014 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种用于提取家禽DNA的细胞裂解液，包括0.5g/L～2.5g/L Tris‑HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl2；0.5g/L～1.5g/L EDTA；20mL/L～30mL/L Triton X‑100；余量的水；用NaOH调节pH值为8。本发明还提供了一种含有上述技术方案所述的细胞裂解液的家禽DNA提取试剂盒。本发明还提供了一种家禽DNA提取方法。本发明提供的方法使得禽类血液DNA提取时间比传统方法显著缩短，在达到或超过试剂盒提取质量的同时，其成本远低于试剂盒方法，步骤少，操作难度低于主流试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 提取 家禽 dna 细胞 裂解 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
一种家禽DNA提取方法，包括：a)将10～20μL新鲜抗凝家禽类血样与1000μL Buffer WY溶液震荡混合，60～70℃水浴加热5min～8min后10000～15000rpm离心1～3min，将弃上清后得到的物质与1000μL Buffer WY溶液震荡混合，10000～15000rpm离心1～3min后弃上清得到沉淀；所述Buffer WY溶液由0.5g/L～2.5g/L Tris‑HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl2；0.5g/L～1.5g/L EDTA；20mL/L～30mL/L Triton X‑100和余量的水组成；用NaOH调节pH值为8；b)将所述步骤a)得到的沉淀与200μL Buffer YW溶液和10μL 20mg/mL的蛋白酶K溶液震荡混合，60～70℃水浴加热20min～30min后加入100μL 5mol/L的NaCl溶液，混匀后将全部溶液转移至核酸纯化柱中，6000～10000rpm离心1min，得到滤液；所述Buffer YW溶液由0.5g/L～2.5g/L Tris‑HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl2；0.5g/L～1.5g/L EDTA；15g/L～30g/L NaCl；0.5g/L～1.5g/L SDS和余量的水组成；用NaOH调节pH值为8；c)将所述步骤b)得到的滤液与等体积的异丙醇混合，10000～15000rpm离心3～5min后弃上清，然后与1000～1500μL75％酒精震荡混合，10000～15000rpm离心1～3min后弃上清，70～75℃烘箱加热1～3min后加入50mLTE裂解液溶解。
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