[发明专利]用于提取家禽DNA的细胞裂解液、试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明属于生物育种技术领域，尤其涉及一种用于提取家禽DNA的细胞裂解液、试剂盒和方法。

背景技术

家禽分子育种作为现代家禽育种工作不可或缺的技术，常需要对核心群体进行遗传背景鉴定、遗传疾病剔除、隐性遗传性状提纯，如鸡羽色性状中隐性白羽等分子检测相关工作以控制后代群体质量。而DNA提取是后续分子实验的基础，因此，大规模、快速获取家禽基因组对家禽分子育种工作的开展十分必要。

针对禽类血液红细胞具有细胞核的特点并为了减少家禽对采样的应激，目前多以翅下静脉采血为主，以达到从少量静脉血中提取足量的DNA以满足实验需要的目的。现有技术公开了多种家禽血液DNA提取技术，如申请号为201210100069.2的中国专利文献公开了一种安全快速从血液中提取基因组DNA的方法，其以SDS(十二烷基硫酸钠)与Trito X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)相混合为红细胞裂解液，饱和氯化钠溶液为蛋白质沉淀剂并使用乙醇沉淀DNA，该方法提取时间相对较短，能够完成DNA粗提取工作，能普遍应用于血液DNA基因组提取。但是，该方法获得DNA具有较高的蛋白污染，而且使用样品量较大，会加重采样负担、动物应激，减少血样使用次数，对禽类血液DNA提取针对性不强，其耗时比本发明长。

申请号为201110030176.8的中国专利文献公开了一种动物DNA提取的细胞裂解液、试剂盒和方法，以盐酸胍缓冲液为主要裂解液，并加入蛋白酶K后水浴过夜，以饱和酚萃取DNA，该方法在传统DNA提取方法酚-氯仿抽提法上进一步改善，能得到一定质量的DNA基因组。但是，该方法耗时长，需过夜消化，提取全过程长达16小时以上，不利于快速、批量操作。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于提取家禽DNA的细胞裂解液、试剂盒和方法，本发明提供的方法提取操作简便、用时短，成本低。

本发明提供了一种用于提取家禽DNA的细胞裂解液，包括:

0.5g/L～2.5g/L Tris-HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl₂；0.5g/L～1.5g/L EDTA；20mL/L～30mL/L Triton X-100；余量的水；用NaOH调节pH值为8。

作为优选，所述细胞裂解液包括：

1.576g/L Tris-HCl；0.7455g/L KCl；2.033g/L MgCl₂；0.7448g/L EDTA；25mL/L Triton X-100；余量的水；用NaOH调节pH值为8。

本发明还提供了一种用于提取家禽DNA的细胞缓冲液，包括：

0.5g/L～2.5g/L Tris-HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl₂；0.5g/L～1.5g/L EDTA；15g/L～30g/L NaCl；0.5g/L～1.5g/L SDS；余量的水；用NaOH调节pH值为8。

作为优选，所述细胞缓冲液包括：

1.576g/L Tris-HCl；0.7455g/L KCl；2.033g/L MgCl₂；0.7448g/L EDTA；23.376g/L NaCl；1g/L SDS；余量的水；用NaOH调节pH值为8。

本发明提供的上述细胞裂解液和细胞缓冲液优选组合使用，即，本发明还提供了一种用于提取家禽DNA的细胞裂解液，包括Buffer WY和Buffer YW，其中，

所述Buffer WY包括：0.5g/L～2.5g/L Tris-HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl₂；0.5g/L～1.5g/L EDTA；20mL/L～30mL/L Triton X-100；余量的水；用NaOH调节pH值为8；

所述Buffer YW包括：0.5g/L～2.5g/L Tris-HCl；0.3g/L～1.0g/L KCl；1.5g/L～2.5g/L MgCl₂；0.5g/L～1.5g/L EDTA；15g/L～30g/L NaCl；0.5g/L～1.5g/L SDS；余量的水；用NaOH调节pH值为8。