[发明专利]一种牙鲆肌卫星细胞系的构建方法及其鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物和应用

摘要

本发明涉及海水鱼类细胞培养技术，具体说是一种牙鲆肌卫星细胞系的构建方法及其鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物和应用。是将牙鲆肌肉组织经原代培养和传代培养，继而构建细胞系；构建后冷冻保存、复苏和鉴定，其中原代培养和传代培养中所采用的细胞培养液为在细胞培养液中添加胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子。建立的牙鲆肌卫星细胞系形态为梭形或纺锤形单核细胞，该细胞系可以连续传代，能提供大量牙鲆肌卫星细胞。不仅可直接用于牙鲆肌肉发育相关功能基因的研究，为探索鱼类肌肉分化途径的分子机制研究提供丰富的细胞来源，而且可望为牙鲆养殖生产中肌肉性状改良研究及应用提供研究平台。

主权项

一种牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：将牙鲆肌肉组织经原代培养和传代培养，继而构建细胞系；其中，原代培养，将骨骼肌肉组织块加入到细胞培养液中悬浮，而后将肌肉组织块悬液于25±0.2℃下正置培养，待组织块完成贴壁后补加细胞培养液；传代培养，待上述经原代培养的组织块周围细胞迁出并增殖至形成巢式细胞晕时，加入0.25％胰蛋白酶消化液使细胞悬起得细胞悬液，而后利用细胞培养液进行原瓶传代培养，待原瓶传代细胞长满瓶底后，将上述细胞悬液与细胞培养液按1：1‑1：2(v/v)的比例分瓶传代，以后7天传代一次，15代后每3‑5天传代一次，进而细胞系建立成功。