[发明专利]一种牙鲆肌卫星细胞系的构建方法及其鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物和应用

权利要求书

1.一种牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：

将牙鲆肌肉组织经原代培养和传代培养，继而构建细胞系；

其中，原代培养，将骨骼肌肉组织块加入到细胞培养液中悬浮，而后将肌肉组织块悬液于25±0.2℃下正置培养，待组织块完成贴壁后补加细胞培养液；

传代培养，待上述经原代培养的组织块周围细胞迁出并增殖至形成巢式细胞晕时，加入0.25％胰蛋白酶消化液使细胞悬起得细胞悬液，而后利用细胞培养液进行原瓶传代培养，待原瓶传代细胞长满瓶底后，将上述细胞悬液与细胞培养液按1：1-1：2(v/v)的比例分瓶传代，以后7天传代一次，15代后每3-5天传代一次，进而细胞系建立成功。

2.按权利要求1所述的牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：所述细胞培养液为在MEM培养液中加入占细胞培养液总体积20％的胎牛血清，10ng/mL人碱性成纤维生长因子，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，pH值为7.0-7.4,于4℃下保存，备用。

3.按权利要求1所述的牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：所述骨骼肌肉组织块为将牙鲆骨骼肌组织置于细胞培养液中3-5min后，吸出培养液，用1.0-1.2mLPBS(pH7.2)反复冲洗骨骼肌组织，再吸出PBS，将肌肉组织剪成小块，待用。

4.按权利要求1或3所述的牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：所述肌肉组织为约1mm³大小的小块。

5.按权利要求1所述的牙鲆肌卫星细胞系，其特征在于：所述原代培养组织块周围细胞迁出并增殖至形成巢式细胞晕时，吸出培养液，用PBS(pH7.2)冲洗，吸出PBS，加入0.25％胰蛋白酶液消化，而后显微镜下观察到细胞收缩即吸弃胰蛋白酶液，继续在显微镜下观察，待细胞变圆，在原瓶中加入细胞培养液使细胞悬浮，而后将悬液进行传代。

6.一种用于鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物，其特征在于：用于鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物为，正向引物(F)TACTAGTGCTCGCCTGACATG；反向引物(R)TCAATCCTTAAACAATGCTGG。

7.一种用于鉴定牙鲆肌卫星细胞标记基因的特异性引物的应用，其特征在于：所述特异性引物用于制备定性和/定量检测牙鲆肌卫星细胞标记基因的试剂盒。