[发明专利]一种结核杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒及检测方法

摘要

一种结核杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒及检测方法属检验检疫领域。该试剂盒，包括如下组分：反应混合液、引物混合液、双蒸水、Bst DNA聚合酶、阳性对照模板、显色液、封闭剂。采用上述结核杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒的检测方法，按照以下步骤进行：(1)模板制备；(2)加样；(3)等温扩增：将上述样品混匀，置于65℃保温50min，冷却至室温；观察颜色变化；(4)阴阳性判断：绿色表示待测样品中存在结核杆菌(阳性)，橙色表示待测样品中不存在结核杆菌(阴性)。本发明操作简便、用时少、灵敏度高、特异性强，适用于检验检疫部门和卫生医疗单位对结核杆菌的检测，并有望成为简易的常规检测手段,尤其适用于基层单位。

主权项

一种结核杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒，其特征在于包括如下组分：反应混合液、引物混合液、双蒸水、Bst DNA聚合酶、阳性对照模板、显色液、封闭剂；所述反应混合液的组分及浓度为：40mM Tris‑HCl(pH8.8)，20mM KCl,20mM(NH₄)₂SO₄，体积百分比0.2％的Triton X‑100，1.6M甜菜碱,16mM MgSO₄,2.8mM dNTP；所述引物混合液的组分为：内引物FIP和BIP各80pmol,，外引物F3和B3各10pmol，环引物LB和LF各40pmol；所述Bst DNA聚合酶为：8U Bst DNA聚合酶；所述阳性对照模板根据下列结核分枝杆菌基因靶序列合成的人工质粒；结核杆菌的靶序列为：TCCACGCCGCCAACTACGGTGTTTACGGTGCCCGCAAAGTGTGGCTAACCCTGAACCGTGAGGGCATCGAGGTGGCCAGATGCACCGTCGAACGGCTGATGACCAAACTCGGCCTGTCCGGGACCACCCGCGGCAAAGCCCGCAGGACCACGATCGCTGATCCGGCCACAGCCCGTCCCGCCGATCTCGTCCAGCGCCG；所述显色液为：钙黄绿素。