[发明专利]流产嗜性衣原体和鹦鹉热嗜性衣原体保护性抗原MOMP和MIP共表达载体及其构建和表达方法有效
申请号: | 201410375009.0 | 申请日: | 2014-08-01 |
公开(公告)号: | CN104131020B | 公开(公告)日: | 2017-02-22 |
发明(设计)人: | 周继章;李兆才;曹小安;宫晓炜;陈启伟 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/66;C07K14/295;A61K39/118;A61P31/00 |
代理公司: | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司11385 | 代理人: | 董芙蓉 |
地址: | 730046 *** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | 本发明公开了一种流产嗜性衣原体MOMPa和MIPa和鹦鹉热衣原体MOMPp和MIPp编码基因共表达载体及其构建方法和表达方法,载体分别为在同一宿主菌中表达的pETDuet‑1、pRSFDuet‑1,载体上分别连接有流产嗜性衣原体MOMPa和MIPa和鹦鹉热嗜性衣原体MOMPp和MIPp四个编码基因。在此基础上本发明还公开了所述共表达载体的构建方法和表达方法。 | ||
搜索关键词: | 流产 衣原体 鹦鹉 热嗜性 保护性 抗原 momp mip 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
【主权项】:
流产嗜性衣原体MOMPa和MIPa和鹦鹉热衣原体MOMPp和MIPp编码基因共表达载体,其特征在于所述共表达载体分别为在同一宿主菌中表达的pETDuet‑1和pRSFDuet‑1载体;所述共表达载体的构建方法包括下述步骤:1)利用PCR方法扩增MOMPa、MIPa、MOMPp和MIPp蛋白编码基因;2)利用NdeI酶切pETDuet‑1、pRSFDuet‑1和pET‑32a(+)载体,将酶切后的pETDuet‑1、pRSFDuet‑1分别与酶切后的pET‑32a(+)载体序列片段在T4DNA连接酶的作用下连接得到改造后的pETDuet‑1和pRSFDuet‑1载体;3)将改造后的两个载体进行EcoRI、PstI双酶切,MOMPa和MIPp的编码基因分别用EcoRI、PstI双酶切,将改造后的pETDuet‑1双酶切产物、改造后的pRSFDuet‑1双酶切产物与MOMPa编码基因双酶切产物、MIPp的编码基因双酶切产物分别在T4DNA连接酶作用下进行连接得到表达载体;4)对步骤3)所得表达载体分别进行BglII、XhoI双酶切,对MIPa和MOMPp的编码基因进行BglII、XhoI双酶切,然后将pETDuet‑MOMPa双酶切产物与MIPa编码基因双酶切产物、pRSFDuet‑MIPp双酶切产物与MOMPp编码基因双酶切产物在T4DNA连接酶的作用下连接得到pETDuet‑MOMPa‑MIPa和pRSFDuet‑MIPp‑MOMPp表达载体。
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