[发明专利]一种从虎杖中酶解提取白藜芦醇的方法

摘要

一种从虎杖中酶解提取白藜芦醇的方法，涉及从天然植物的虎杖中制备白藜芦醇的方法。本发明以市售的虎杖根茎为原料，经酶解反应、醇深度提取和分离浓缩、干燥的简单工艺而制得白藜芦醇晶体粉末产品。本发明方法具有酶解充分且时间短，操作成本低，运行安全性高，充分利用原料和有机溶剂，废液主要为水，有利于环境保护，易于工业化推广应用等特点。用本发明方法制备出的白藜芦醇晶体粉末产品具有纯度高，最高达98.31％；总产率高，最高达1.40％等特点。本发明可广泛应用于生产白藜芦醇晶体产品；采用本发明方法制备的产品可广泛应用于预防心血管疾病和保肝抗癌的医用药品及护肤美容品的精细化工生产中。

主权项

一种从虎杖中酶解提取白藜芦醇的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下：(1)酶解反应先将市售的虎杖根茎原料放置于粉碎机中进行粉碎，再经240～320目的筛进行分筛，收集过筛的粉末，未过筛的颗粒再返回粉碎机中进行粉碎，然后，按虎杖粉末的质量∶纤维素酶的质量∶醋酸一醋酸钠缓冲溶液的体积之比为1g∶(1～10)mg∶(10～50)mL的比例，先用高浓度盐酸或氢氧化钠溶液调节所述缓冲溶液的pH值为4～6后，将虎杖粉末和调节pH值后的缓冲溶液，依次放置于间歇反应器中，在30～60℃恒温和80～200r/min的转速下，搅拌15～30min后，再加入纤维素酶，继续恒温搅拌，进行酶解反应15～30h，就制得酶解反应后的固液混合物；(2)醇深度提取第(1)步完成后，先将第(1)步制得的酶解反应后的固液混合物，放置于压滤机中进行固液分离，分别收集滤液，即为酶解提取后的滤液和固体残渣，后按照固体残渣的质量∶体积分数为50％～75％的甲醇溶液的体积之比为1g∶(5～20)mL的比例，将所述的固体残渣和所述的甲醇溶液放置于提取罐中，在温度为35～65℃、搅拌速度为80～200r/min的条件下进行第一次醇提15～60min后，并进行第一次过滤，分别收集第一次醇提的过滤液和固体残渣，然后，取第一次醇提时的相等体积、相等浓度的甲醇溶液和第一次收集的固体残渣，再放回提取罐中，在温度为35～65℃、搅拌速度为80～200r/min的条件下进行第二次醇提15～60min后，并进行第二次过滤，分别收集第二次醇提的过滤液和固体残渣，如此重复1～3次，最后，合并各次收集的醇提过滤液，放置于蒸发浓缩器中，进行蒸发浓缩至无醇味为止，分别收集浓缩液和蒸发的溶剂，合并酶解提取后的滤液和各次醇提收集的浓缩液，就制得白藜芦醇粗品液；(3)制备白藜芦醇晶体粉末产品①大孔树脂的初步分离与洗脱第(2)步完成后，按照大孔树脂质量∶第(2)步制得的白藜芦醇粗品液的体积之比为1g∶(6～10)mL的比例，先采用常规的大孔树脂填充法，将大孔树脂填充入分离柱中，用恒流泵，将体积为1～3BV的、体积分数为10～20％的乙醇溶液，以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱内，进行润洗，并收集流出的润洗液，然后，将所述的白藜芦醇粗品液，以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱进行吸附，并收集流出的溶液，然后，将体积为2～5BV的蒸馏水，以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱内进行第一次洗脱，收集第一次流出的洗脱液，再然后，先将体积为3～5BV的、体积分数为20～30％的乙醇溶液，以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱内进行第二次洗脱，收集第二次流出的洗脱液，后将体积为3～5BV的、体积分数为30～50％的乙醇溶液，以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱内进行第三次洗脱，收集第三次流出的洗脱液，并通过蒸发浓缩器进行蒸发浓缩，分别收集蒸发液，即乙醇溶剂和浓缩液，即白藜芦醇苷富集浓缩液，再将体积为4～10BV的、体积分数为60～80％的乙醇溶液，再以1～3BV/h的流量通入所述的分离柱内进行第四次洗脱，收集第四次流出的洗脱液，并通过蒸发浓缩器蒸发浓缩，分别收集蒸发液，即乙醇溶剂和浓缩液，即白藜芦醇富集浓缩液，对所述的大孔树脂为NKA‑9型或NKA‑II型或AB‑8型或HPD950型或HPD400型；②制备白藜芦醇晶体粉末产品第(3)‑①步完成后，按中性氧化铝的质量∶第(3)‑①步收集的浓缩液，即白藜芦醇富集浓缩液的体积之比为1g∶(10～20)mL的比例，采用常规填充方法将中性氧化铝填充入层析柱中后，先用恒流泵，将体积为1～3BV的、体积分数为60～80％的乙醇溶液，以1～3BV/h的流量通入所述的层析柱内进行润洗，收集流出的润洗液，再分别将所述的浓缩液，即白藜芦醇富集浓缩液和体积为1～3BV的、体积分数为60～80％的乙醇溶液，以1～3BV/h的流量通入所述的层析柱内进行脱色，收集流出的脱色液，即脱色后的白藜芦醇溶液，然后，对收集的脱色液，即脱色后的白藜芦醇溶液，通过蒸发浓缩器蒸发浓缩，分别收集蒸发液，即乙醇溶剂和浓缩液，即白藜芦醇浓缩液，对收集的浓缩液，即白藜芦醇浓缩液就是制得的第一次纯化后的白藜芦醇溶液，最后，按活性炭的质量∶第一次纯化后的白藜芦醇溶液的体积之比为1g∶(50～100)mL的比例，将第一次纯化后的白藜芦醇溶液和活性炭，放置于脱色罐中，常温搅拌1～5h进行第二次纯化后，对第二次纯化后的混合物进行抽滤，分别收集抽滤渣，即活性炭固体和抽滤液，即为第二次纯化后的白藜芦醇溶液，将抽滤液，即第二次纯化后的白藜芦醇溶液，通过蒸发浓缩器，进行蒸发浓缩至浓缩液的体积为浓缩前体积的1/5～1/30为止，分别收集蒸发液，即乙醇溶剂和浓缩液，即第二次纯化后的白藜芦醇浓缩液，对收集的浓缩液，即第二次纯化后的白藜芦醇浓缩液，放置于冷冻干燥箱中，先在‑10～‑18℃预冻2～3h，再在压力为20～60Pa、温度为‑40～‑60℃条件下，冷冻干燥24～30h，就制得白藜芦醇晶体粉末产品。