[发明专利]一种注射级α-环糊精的制备方法

摘要

本发明公开了一种注射级α-环糊精的制备方法，采用环氧基树脂作载体制备α-CGTase固定化酶，将淀粉制成淀粉乳，加入α-CGTase固定化酶进行淀粉液化，再转入用装填有α-CGTase固定化酶的填充反应器中反应，转化液经超滤收集透出液；透出液经α-淀粉酶和糖化酶处理、活性炭脱色、反渗透膜浓缩、重结晶，过滤去除β-环糊精，母液再进一步经反渗透膜浓缩，结晶，过滤，烘干研磨即得注射级α-环糊精。本发明制得的固定化酶具有稳定性好、可以重复利用，且极易与产物、底物分离，酶的利用效率高、可连续操作及自动化控制，工艺简便，生产成本低等优点。采用无溶剂过程生产α-环糊精，生产设备简单，反应条件温和，能耗低，无溶剂残留污染，更加环保节能。

主权项

一种注射级α‑环糊精的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（a）α‑CGTase产生菌的诱导表达：α‑CGTase产生菌经发酵培养后离心，收集上清液即为粗酶液；粗酶液经过超滤浓缩得到浓缩粗酶液；（b）α‑CGTase固定化酶的制备：将环氧基树脂加入磷酸缓冲溶液浸泡至溶胀后，加入上述浓缩粗酶液，经振荡固定化反应后离心，弃去上清液，加入巯基乙醇封闭剩余的环氧基团，过滤，洗涤，直至洗出液无酶活性，即得α‑CGTase固定化酶，4℃保存，备用；（c）淀粉的液化：在分批搅拌罐中加入淀粉制成淀粉乳，加入CaCl₂后，调整pH，加入α‑CGTase固定化酶并搅拌反应得到淀粉液化液；（d）淀粉的转化：将α‑CGTase固定化酶填充在填充反应柱中，两端用玻璃纤维塞隔离，拧紧两端旋帽使填充反应柱内部呈密封状态；将液化储罐中的淀粉液化液用恒流泵输入填充反应柱进行转化反应；得到的转化液经超滤，透过液为α‑环糊精溶液，截留液继续打入填充反应柱进行转化反应；α‑环糊精溶液加入固定化α‑淀粉酶和固定化糖化酶反应，以除去未转化的淀粉，并改善转化液的滤过性；转化液通砂芯漏斗过滤回收固定化α‑淀粉酶和固定化糖化酶，滤液储存于储液罐中；（e）精制纯化：滤液中加入活性炭搅拌后过滤，经反渗透膜浓缩，5℃～15℃搅拌，待β‑环糊精重结晶后，过滤弃晶体，母液经过进一步反渗透膜浓缩至α‑环糊精含量在40%～50%时，0℃～5℃搅拌结晶得α‑环糊精，烘干研磨即得注射级α‑环糊精。