[发明专利]用于同时检测海洋中五种致病菌以及三种毒力基因的多重PCR引物及其设计方法

摘要

本发明涉及一种用于同时检测海洋中五种致病菌以及三种毒力基因的多重PCR引物及其设计方法，该设计方法包括利用引物设计软件设计同时检测粪肠球菌、迟缓爱德华菌、肉杆菌、苏云金杆菌和溶藻弧菌以及阴沟肠杆菌gyrB基因、副溶血弧菌tlh基因、粪肠球菌cylA基因的多重PCR引物组合、筛选竞争状态优势引物，利用PCR方法对竞争状态优势引物进行扩增验证，最后去除扩增引物中的竞争状态劣势引物，获得多重PCR引物组合，同时还公开了多重PCR的检测方法，与现有技术相比，本发明的优点在于采用本发明建立的多重PCR的引物组合同时检测海洋中五种致病菌以及三种毒力基因，具有操作简便、快速，特异性强，灵敏度高等优点。

主权项

一种用于同时检测海洋中四种致病菌以及三种毒力基因的多重PCR引物，其特征在于：该四种致病菌以及三种毒力基因的多重PCR引物分别包括粪肠球菌、迟缓爱德华菌、肉杆菌、苏云金杆菌以及阴沟肠杆菌gyrB基因、副溶血弧菌tlh基因、粪肠球菌cylA基因的多重PCR引物；其中，粪肠球菌的上下游引物为：P1：5’‑TGCCGCATGGCATAAGAGTC‑3’；P2：5’‑TGCATCACCTCGCGGTCTAG‑3’；迟缓爱德华菌的上下游引物为：P3：5’‑GACTCAACGGCGGATTTCAC‑3’；P4：5’‑TGGCGACACCGAGCAGATT‑3’；肉杆菌的上下游引物为：P5：5’‑CCATGGACAATGATTGTTG‑3’；P6：5’‑CTCGAGGCAGCGAGATCTT‑3’；苏云金杆菌的上下游引物为：P7：5’‑CTATTCTCGTATGTTCATTCG‑3’；P8：5’‑CTTCATTACATTCAACCCAG‑3’；阴沟肠杆菌gyrB基因的上下游引物为：P11：5’‑AAGCGHCCNGSNATGTAYATHGG‑3’；P12：5’‑CCNGCNGARTCNCCYTCNAC‑3’；副溶血弧菌tlh基因的上下游引物为：P13：5’‑TGAGTTGCTGTTGTTGGATGC‑3’；P14：5’‑GTTGATGACACTGCCAGATGC‑3’；粪肠球菌cylA基因的上下游引物为：P15：5’‑GACTCGGGGATTGATAGGCA‑3’；P16：5’‑GCTGCTAAAGCTGCGCTTAC‑3’。