[发明专利]一种促进重组蛋白胞外分泌的发酵工艺

摘要

本发明公开了一种促进重组蛋白胞外分泌的发酵工艺，属于发酵工程技术领域。本发明以含有重组蛋白基因的大肠杆菌为生产菌株，在工业级发酵培养基中连续流加甘油进行分批补料发酵，对数生长期开始流加乳糖进行诱导产酶，在发酵过程中流加甘氨酸促进重组蛋白的胞外分泌。采取本策略进行发酵实现了重组蛋白的高效胞外表达，大幅提高了重组蛋白的生产强度。本工艺采用工业上常用的甘油、蛋白胨、酵母粉、无机盐等原料进行生产，简单易行，适于大规模生产。

主权项

一种提高重组蛋白的胞外生产方法，其特征在于以含有目标蛋白基因的大肠杆菌为生产菌株，发酵工艺如下：将活化后的种子培养液接入发酵培养基中，通过控制搅拌转速和通风量使溶氧维持20‑30％，控制温度为25‑37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5，培养6‑7小时；当溶氧快速上升至80‑100％，以指数流加的方式补加补料液使溶氧维持在20‑30％，温度维持在25‑37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5。当菌体生长到一定OD₆₀₀时，添加适量的甘氨酸溶液；继续培养至菌体达到一定OD₆₀₀时，添加适量的乳糖溶液进行诱导；同时溶氧控制在20‑30％，控制pH7.0±0.5，诱导20‑30小时。