[发明专利]实时荧光PCR和探针法融解曲线结合的多重核酸检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及多重核酸检测探针以及检测方法，具体涉及一种实时荧光PCR和探针法融解曲线技术相结合的多重核酸检测探针和检测方法。本发明还涉及所述探针或方法用于多重核酸检测的用途。本发明在基于实时荧光PCR技术的反应体系中增加了根据融解曲线反应程序设计的探针，并提供了相应检测方法，其在同一反应体系内可检测的样本数可达到基于实时荧光PCR技术可检测的样本数的两倍。

主权项

1.一种检测方法，所述方法包括以下步骤：(1)在基于Taqman探针实时荧光PCR的基本反应体系中，另外加入一种或多种待测核酸样本，以及与该待测核酸样本对应的一个或多个融解曲线探针；(2)同时设定Taqman探针实时荧光PCR反应程序以及探针法融解曲线反应程序，所述融解曲线反应程序的起始温度与所述融解曲线探针的退火温度相比，低3‑20℃；(3)反应程序结束后，对得到的基于Taqman探针实时荧光PCR技术的扩增曲线和基于探针法融解曲线技术的融解曲线进行分析；其中，所述融解曲线探针与核酸结合的退火温度比同一反应体系中Taqman实时荧光探针与核酸结合的退火温度低3‑20℃；并且，所述融解曲线探针不能被具有5’‑3’外切酶活性的DNA聚合酶水解，所述融解曲线探针的5’端的五碳糖、碱基或者报告荧光基团被基团修饰，所述基团为氨基、甲基、硫基或生物素；在步骤(2)中，所述Taqman探针实时荧光PCR反应程序中的退火温度低于所述Taqman实时荧光探针的退火温度，并且高于所述融解曲线探针的退火温度。