[发明专利]一种用于诊断肝癌的联合型代谢标志物及其检测试剂盒

摘要

本发明涉及血清样品中小分子代谢物色氨酸、谷氨酰胺、2‑羟基丁酸作为联合标志物在制备用于诊断受试者中的肝癌患者的试剂盒中的新应用。本发明还涉及检测受试者中的肝癌患者的试剂盒，通过检测来自受试者的血清样品中上述联合标志物各自的相对浓度，基于二元逻辑回归方程计算所述联合标志物变量P，再基于确定的截点值，判断所述受试者是否患有肝癌。所述试剂盒可实现高灵敏、高效检测本发明涉及的几种小分子代谢物，且具有检测成本低，重复性好的特点。本发明可应用于辅助肝细胞癌的临床诊断，具有诊断灵敏度高，可早期判别肝癌以及与传统的临床诊断标志物甲胎蛋白相互补充的特点，具有较好的应用前景。

主权项

联合型的代谢标志物在制备用于血清诊断受试者中的肝细胞癌患者的试剂盒的用途，所述联合型的代谢标志物由色氨酸、谷氨酰胺、2‑羟基丁酸共同构成。2、一种非诊断目的的计算受试者的血清样本中的联合型标志物变量的方法，其中所述受试者包括肝细胞癌患者，及对照的肝硬化患者和/或正常人，所述联合型标志物由色氨酸、谷氨酰胺、2‑羟基丁酸共同构成，所述方法包括以下步骤：1）以含有内标物的提取液处理来自受试者的血清样本，沉淀血清蛋白后，进一步提取极性代谢物，随后进行超滤、冻干，以纯水复溶后进行毛细管电泳‑质谱分析；2）在毛细管电泳‑质谱分析获得的总离子流图上，提取色氨酸、谷氨酰胺及2‑羟基丁酸的电泳峰强度，色氨酸的提取参数为:正离子模式，质荷比为205.0972±0.005的离子，谷氨酰胺的提取参数为: 正离子模式，质荷比为147.0764±0.005的离子, 2‑羟基丁酸提取参数为: 负离子模式，质荷比为103.0401±0.005的离子；3）以试剂盒中三种物质色氨酸、谷氨酰胺、2‑羟基丁酸的标准品对检测到的离子进行定性；将浓度为50µM的三种物质标准品水溶液进行毛细管电泳‑质谱分析，确定三种标准品的毛细管电泳迁移时间以及三种离子的实测质荷比，与在受试者样本中实测的三种物质相比较；4）对每一受试者样本中经定性后的三种物质的电泳峰强度分别与提取液中的内标物比较，获得色氨酸、谷氨酰胺、2‑羟基丁酸的相对浓度；5）以上述三种代谢物的相对浓度值，基于二元逻辑回归方程计算联合型标志物变量P。