[发明专利]一种用于诊断肝癌的联合型代谢标志物及其检测试剂盒

权利要求书

1.联合型的代谢标志物在制备用于诊断受试者中的肝癌患者的试剂盒的用途，所述联合标志物由色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸共同构成。

2.一种检测受试者中的肝癌患者的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)标准品：包括色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸，所述标准品分别用于对应的血清代谢物色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸的定性；

(2)用于预处理来自受试者的血清样品的提取液：所述提取液为同时包含正离子及负离子分析模式下两类内标物的甲醇溶液，其中正离子模式内标物至少包括下列代谢物中的一种：5-10μM蛋氨酸砜，2-10μM稳定同位素标记的色氨酸，2-10μM稳定同位素标记的谷氨酰胺；同时，负离子模式内标物至少包括下列代谢物中的一种：5-10μMD-樟脑-10-磺酸钠盐，2-10μM稳定同位素标记的2-羟基丁酸；

(3)用于毛细管电泳-质谱分离的缓冲液，包括：用于正离子分析模式下的缓冲液为0.9-1.1M甲酸，用于负离子分析模式下的缓冲液为40-60mM的乙酸铵(PH值需调至8.5)。

3.一种计算受试者的血清样品中的联合标志物变量的方法，所述联合标志物由色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸共同构成，所述方法包括以下步骤：

1)以含有内标物的提取液处理来自受试者的血清样本，沉淀血清蛋白后，进一步提取极性代谢物，随后进行超滤、冻干；以纯水复溶后进行毛细管电泳-质谱分析；

2)在毛细管电泳-质谱分析获得的总离子流图上，提取色氨酸、谷氨酰胺及2-羟基丁酸的电泳峰强度；色氨酸的提取参数为:正离子模式，质核比为205.0972±0.005的离子，谷氨酰胺的提取参数为:正离子模式，质核比为147.0764±0.005的离子,2-羟基丁酸提取参数为:负离子模式，质核比为103.0401±0.005的离子；

3)以试剂盒中三种物质色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸的标准品对检测到的离子进行定性；将浓度为50μM的三种物质标准品水溶液进行毛细管电泳-质谱分析，确定三种标准品离子的毛细管电泳迁移时间以及三种离子的实测质核比，与在受试者样本中实测的三种物质相比较；

4)对每一受试者样本中经定性后的三种物质的电泳峰强度分别与提取液中的内标物比较，获得色氨酸、谷氨酰胺、2-羟基丁酸的相对浓度；

5)以上述三种代谢物的相对浓度值，基于二元逻辑回归方程计算联合标志物变量P。

4.根据权利要求2所述试剂盒，其中受试者包括肝细胞癌患者，及对照的肝硬化患者和/或正常人。