[发明专利]一种检测气溶胶中牛传染性鼻气管炎病毒的方法

摘要

本发明公开了一种检测气溶胶中牛传染性鼻气管炎病毒的方法：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本的基因组总DNA；(3)检测：进行PCR扩增；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断气溶胶样本中是否含有牛传染性鼻气管炎病毒。本发明还公开了特异性引物(如SEQIDNO.3、4所示)以及试剂盒(由特异性引物、牛传染性鼻气管炎病毒阳性质粒pEASY-T3-D、SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR试剂和ddH₂O组成)。本发明的方法，既可用于牛传染性鼻气管炎病毒气溶胶样本的检测，也可用于临床血液、奶样、组织等样本的检测，具有广泛的应用前景。

主权项

一种检测气溶胶中牛传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于：步骤如下：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本的基因组总DNA；(3)检测：以上述提取的基因组总DNA为模板，采用试剂盒进行SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR，具体如下：所述试剂盒由特异性引物、牛传染性鼻气管炎病毒阳性质粒pEASY‑T3‑D、SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR试剂和ddH₂O组成；所述牛传染性鼻气管炎病毒阳性质粒pEASY‑T3‑D是由序列为SEQIDNO.5所示的DNA片段与pEASY‑T3载体相连接后得到的重组质粒；所述特异性引物的序列如下：上游引物IBRV‑F为5′‑ACGGACGACGAGCTGGGACT‑3′；下游引物IBRV‑R为5'‑CGGCAGCGAAACCATGAAAT‑3'；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断：若溶解曲线为S型曲线，则表明气溶胶样本中含有牛传染性鼻气管炎病毒；若溶解曲线为一条直线，则表明气溶胶样本中不含有牛传染性鼻气管炎病毒。