[发明专利]抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物及其制剂

摘要

本发明涉及一种抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物，其由如下方法制备而成：复合抗原制备；对鸡进行强化免疫；粗提物制备；纯化。本发明还涉及该组合物制成的制剂，其按照质量百分含量及包括：抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物或其粗提物为0.15-0.3％；聚维酮K30为0.3-0.6％；丙三醇为1.0-2.0％；聚山梨酯80为0.3-0.5％；清凉醇香精为0.10-0.30％；食用香精为0.05-0.1％；蒸馏水加至100％。本发明的抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物及其制剂的抗体活性高、专一性强，特异性杀菌、效果好，不影响微生态平衡，对人体无不良刺激，安全性能高。

主权项

一种抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物，所述六种致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、A簇B型溶血性链球菌，绿脓杆菌、变异链球菌和白色念珠菌，其特征在于由如下方法制成： 复合抗原制备：选取A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变异链球菌和白色念珠菌，在37℃环境下用Luria‑Bertani培养基在三气培养箱中培养18h；然后将上述菌种分离并分接种到肉汤培养基中，在37℃环境下在恒温双层振荡培养箱中培养24h，所述恒温振荡培养箱的转速为200rpm，然后灭活备用；将培养好并经灭活处理的细菌按A簇B型溶血型链球菌25‑40％，金黄色葡萄球菌15‑20％，绿脓杆菌10‑15％，大肠杆菌10‑15％，变异链球菌10‑15％，白色念珠菌10‑15％的比例混合匀制得菌株混合体；然后将混合好的菌株混合体溶解在0.1mol/L的PBS溶液中制得菌株混合体溶液，所述菌株混合体溶液的浓度为1mg/ml；按1∶1的比例将弗氏佐剂加入混合好的菌株混和体溶液中搅拌均匀，制得乳状全菌复合抗原；将全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得全菌和菌体成份的复合抗原； 对鸡进行强化免疫：将制得的复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.5ml；然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次；首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋； 粗提取物制备：用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，除去蛋清，留取蛋黄并搅拌均匀；按蛋黄体积的4‑6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀；调试pH至5.0‑6.0之间；然后将其冷却至2‑6℃，静置12小时‑24小时；然后经高速离心分离机离心分离20分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10‑20倍，将质量浓度为14％的硫酸钠溶液加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再经高速离心机离心分 离，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得粗提物干粉成品； 纯化：将粗提物干粉成品通过离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，得到抗六种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白组合物。