[发明专利]一种利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法

摘要

本发明提供了一种快速高效、经济环保的基于金磁微粒的微量组织总核酸纯化方法，实现微量组织总核酸共同提取。该方法整个纯化过程在无菌操作台完成，包括以下步骤：(1)裂解样品，其中裂解液为终浓度为2M-8M硫氰酸胍溶液与0.01-0.05M柠檬酸钠的混合溶液，并在使用前以体积比25:1加入β-巯基乙醇；(2)形成含金磁微粒-核酸复合物的混合溶液；(3)将金磁微粒-核酸复合物从混合溶液中分离；(4)依次采用第一清洗液和第二清洗液进行清洗，其中第一清洗液是终浓度为2M-8M氯化锂溶液和50％(V/V)乙醇混合溶液，第二清洗液是70％-85％(V/V)乙醇；(5)洗脱，分离，即为纯化得到的总核酸。

主权项

一种利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于，整个纯化过程在无菌操作台完成，包括以下步骤：(1)裂解样品取待纯化样本，加入裂解液中，充分研磨至无固体组织存在的匀浆液，加入稀释液混匀备用；所述裂解液为终浓度为2M‐8M硫氰酸胍溶液与0.01‐0.05M柠檬酸钠的混合溶液，并在使用前以体积比25:1加入β‐巯基乙醇；(2)形成含金磁微粒‐核酸复合物的混合溶液取金磁微粒溶液置于一洁净离心管中，磁性分离后去除上清液，加入结合液后与步骤(1)得到的匀浆液混合均匀，室温下静置使其充分结合，形成含金磁微粒‐核酸复合物的混合溶液；(3)将金磁微粒‐核酸复合物从混合溶液中分离对混合溶液磁性分离，弃去管内液体，管内的固体成分为所得到的金磁微粒‐核酸复合物；(4)清洗依次采用第一清洗液和第二清洗液对收集到的金磁微粒‐核酸复合物进行清洗，其中第一清洗液是终浓度为2M‐8M氯化锂溶液和50％(V/V)乙醇混合溶液，第二清洗液是70％‐85％(V/V)乙醇；(5)洗脱将洗脱液与清洗后的金磁微粒‑核酸复合物混合均匀，使DNA与RNA从磁性微粒上洗脱下来，在外加磁场的作用下，将磁性微粒与洗脱下的总核酸分离，收集上清液，即为纯化得到的总核酸。